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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » DEAE-sepharose fast flow 分离纯化多糖
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gwkzp

木虫 (小有名气)

[求助] DEAE-sepharose fast flow 分离纯化多糖 已有4人参与

我用DEAE-sepharose fast flow 来分离纯化多糖，为什么上蛋白纯化仪的时候柱子里液面的水总干呢，向里面加水，过一会又干了，1.6*25的柱子，流速为0.5ml/min,总感觉是进的液体少而流出的液体多，求指导。凝胶我是水泡24小时，然后HCl浸泡12小时，用0.2mM TRIS(pH=7.4)溶解的。
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1楼 2016-05-27 14:31:46
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gwkzp(99503102代发): 金币+1, 感谢应助，继续加油！ 2016-08-29 21:59:29
柱子装的太高了吧，然后密闭性不好。换个柱子吧，离子交换的径高比不1:1到1:3比较合适。祝顺利。
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2楼2016-05-27 15:23:13
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qingxiayuan

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gwkzp(99503102代发): 金币+1, 感谢应助，继续加油！ 2016-08-29 21:59:36
这样的柱子高度还好啊。应该是气密性不好，在装柱子前最好检查一下柱子的气密性
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3楼2016-05-27 19:00:05
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w911227

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gwkzp(99503102代发): 金币+1, 感谢应助，继续加油！ 2016-08-29 21:59:42
柱子的密闭性不行吧，我们用1.6*40的都没有问题
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苦难的日子终将逝去，但强者却永存
4楼2016-05-28 16:31:43
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hrjun

金虫 (初入文坛)
★
gwkzp(99503102代发): 金币+1, 回帖很精彩！ 2016-08-29 21:59:51
柱子上端没密封，检查一下柱子密封圈是否破损和上活塞的内螺柱是否旋紧。另外，这个填料预处理一般用0.1M的氢氧化钠水溶液，酸处理是针对阳离子填料的，浸泡时间半小时以内，长了可能会降解。

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5楼2016-05-28 23:16:03
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gwkzp(99503102代发): 金币+1, 感谢应助，继续加油！ 2016-08-29 21:59:57
多糖不是都用G25么？为何用DEAE-sepharose，离子柱，单糖又不带电，莫非是为了分离蛋白？
你用的是高流速的，上面多加一些流动相。
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6楼2016-05-29 23:50:49
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