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8128sherry

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于大分子mtor和p-mtor 的WB问题已有2人参与

我想问下大家做mtor和p-mtor的曝光时间都在多少,我做mtor曝光10分钟左右出来条带,但是有好多条。而P-mtor15和10分钟分钟太黑,5分钟又太白。但是我朋友说他那会做,曝光30分钟。。我就不知道我这个时间好像太短了啊。第一次做WB实验,再曝光问题上面没啥经验。。所以想请教一下

关于大分子mtor和p-mtor 的WB问题
我想问下,这个出现这么多条带是为什么?抗体用的CST的,1:1000,二抗1::5000


关于大分子mtor和p-mtor 的WB问题-1
这是内参bcta actin的
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ljy910203

铜虫 (小有名气)

你好  楼主  最近刚刚做mtor的WB,怎么也没有结果,能不能请教下你的这个实验条件啊!方便的话能加个QQ吗,不胜感激
5656+12
7楼2016-07-08 16:24:19
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jkbio2016

银虫 (初入文坛)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
抗体特异性不好,或者说不同蛋白含有相同的抗原表位,就会产生非特异性条带,不用这么纠结,只要结果条带不是连在一起,进行条带分析不影响数值读取就行,放图的时候只截取你的目的蛋白条带就可以了。
2楼2016-05-27 09:36:43
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ikevin12345

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

http://www.ebioq.com/openlab/56/0,这个网站上有关于WB实验资料问答,你可以看着学习下。当初我们实验室为了节省时间,老板就让我送出去做了。我选择的这家,结果还不错,你可以看看。
3楼2016-05-30 10:00:25
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8128sherry

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jkbio2016 at 2016-05-27 09:36:43
抗体特异性不好,或者说不同蛋白含有相同的抗原表位,就会产生非特异性条带,不用这么纠结,只要结果条带不是连在一起,进行条带分析不影响数值读取就行,放图的时候只截取你的目的蛋白条带就可以了。

但是这几个条带都集中在150-250,没法判断哪个是mTOR啊,这才是问题所在。
4楼2016-06-17 04:46:26
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