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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 关于大分子mtor和p-mtor 的WB问题
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8128sherry

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于大分子mtor和p-mtor 的WB问题 已有2人参与

我想问下大家做mtor和p-mtor的曝光时间都在多少，我做mtor曝光10分钟左右出来条带，但是有好多条。而P-mtor15和10分钟分钟太黑，5分钟又太白。但是我朋友说他那会做，曝光30分钟。。我就不知道我这个时间好像太短了啊。第一次做WB实验，再曝光问题上面没啥经验。。所以想请教一下

关于大分子mtor和p-mtor 的WB问题
我想问下，这个出现这么多条带是为什么？抗体用的CST的，1：1000，二抗1：:5000


关于大分子mtor和p-mtor 的WB问题-1
这是内参bcta actin的
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1楼 2016-05-26 04:07:30
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8128sherry

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 314300420 at 2016-06-18 06:54:24
mtor是289吧，你的marker在250上方只有一个条带不是？
...

可是我看有的paper做出来，也不是都在250以上。。。不知道为啥
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6楼2016-06-21 03:57:15
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jkbio2016

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗体特异性不好，或者说不同蛋白含有相同的抗原表位，就会产生非特异性条带，不用这么纠结，只要结果条带不是连在一起，进行条带分析不影响数值读取就行，放图的时候只截取你的目的蛋白条带就可以了。
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2楼2016-05-27 09:36:43
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ikevin12345

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

http://www.ebioq.com/openlab/56/0，这个网站上有关于WB实验资料问答，你可以看着学习下。当初我们实验室为了节省时间，老板就让我送出去做了。我选择的这家，结果还不错，你可以看看。
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3楼2016-05-30 10:00:25
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8128sherry

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by jkbio2016 at 2016-05-27 09:36:43
抗体特异性不好，或者说不同蛋白含有相同的抗原表位，就会产生非特异性条带，不用这么纠结，只要结果条带不是连在一起，进行条带分析不影响数值读取就行，放图的时候只截取你的目的蛋白条带就可以了。

但是这几个条带都集中在150-250，没法判断哪个是mTOR啊，这才是问题所在。
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4楼2016-06-17 04:46:26
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