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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

[求助] ND-2000测出的DNA浓度值是包含蛋白质和RNA等杂质在内的总值还是只是DNA本身的浓度值?

请问,如果DNA样品中有蛋白质或者RNA残留,ND-2000测出的DNA浓度值是包含蛋白质和RNA等杂质在内的总值还是只是DNA本身的浓度值?
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rainboy3529

铁虫 (著名写手)

2楼2016-05-25 23:00:24
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allenchem

木虫 (小有名气)

算是总值吧。但是不能用总值这个词。应该说,蛋白和RNA在260处都有贡献。使得DNA浓度测值虚高。

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3楼2016-05-29 23:50:50
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棍子168

至尊木虫 (著名写手)

天道酬勤
4楼2016-05-30 00:19:52
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qhiv6

新虫 (小有名气)

260/280值在2.2多是不是有蛋白污染?

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5楼2016-05-30 05:48:20
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by allenchem at 2016-05-29 23:50:50
算是总值吧。但是不能用总值这个词。应该说,蛋白和RNA在260处都有贡献。使得DNA浓度测值虚高。

我的也是很高,有2.11,2.05的

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6楼2016-05-30 09:08:15
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allenchem

木虫 (小有名气)

根据我个人经验,DNA一般在1.7~1.9,RNA在1.8~2.0。有些情况会出现超过2的情况,提基因组是,未消化RNA,这事得到的核酸含有基因组,RNA和降解RNA。比值会比较好,用Rnase消化后,比值会降低。

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7楼2016-05-30 09:19:51
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wenhuoyeying

新虫 (正式写手)

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引用回帖:
7楼: Originally posted by allenchem at 2016-05-30 09:19:51
根据我个人经验,DNA一般在1.7~1.9,RNA在1.8~2.0。有些情况会出现超过2的情况,提基因组是,未消化RNA,这事得到的核酸含有基因组,RNA和降解RNA。比值会比较好,用Rnase消化后,比值会降低。
...

我用ND-2000测定DNA浓度较高,达到100-200ng/ul,260/280也接近1.8,但是电泳却跑不出条带,这是为什么呢?是DNA没提出来吗?
8楼2016-05-30 21:49:51
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allenchem

木虫 (小有名气)

更多的情况是DNA降解了,而DNA降解往往和样品的关系更大。是否保存得当,是否反复冻融等等。

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9楼2016-05-30 23:04:15
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allenchem

木虫 (小有名气)

当然,也可能是没提取出来DNA,提出来的都是RNA,而杂质较多拉低比值。这是要考虑的是样品是否研磨充分,是否消化充分。等等。需要具体情况具体分析。

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10楼2016-05-30 23:05:49
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