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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » GFP标记的质粒导入细菌，荧光能保持多久？
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18716248350

新虫 (小有名气)

[求助] GFP标记的质粒导入细菌，荧光能保持多久？ 已有3人参与

如题，有一个质粒上面带有GFP标记，转入细菌后，菌液放冰箱保存，荧光能保持多久？谢谢
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1楼 2016-05-24 11:02:19
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梦弋惊龙

铁杆木虫 (著名写手)

***

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
18716248350: 金币+5 2016-05-27 12:26:12
质粒的稳定性不好评价，我们以前也有过质粒丢失的现象！
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******
2楼2016-05-25 09:51:18
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 梦弋惊龙 at 2016-05-25 09:51:18
质粒的稳定性不好评价，我们以前也有过质粒丢失的现象！

你们放了多久？是-80℃保存了荧光丢失了的吗？

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3楼2016-05-25 11:18:33
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梦弋惊龙

铁杆木虫 (著名写手)

***
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18716248350 at 2016-05-25 11:18:33
你们放了多久？是-80℃保存了荧光丢失了的吗？
...

质粒丢了
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******
4楼2016-05-25 17:38:39
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金圣功成

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
18716248350: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2016-05-27 12:25:29
看不看的到荧光 是表没表达的问题，有的转进菌体cell了 PCR也有 但不表达就看不到。而且荧光要强才有利于下面的实验 。我放过菌液4°冰箱一个礼拜 还能看到 但是亮度明显下降了。楼主要记得在-80°备份咯
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生活不可能像你想象得那么好，但也不会像你想象得那么糟。我觉得人的脆弱和坚强都超乎自己的想象。有时，我可能脆弱得一句话就泪流满面，有时，也发现自己咬着牙
5楼2016-05-26 11:12:23
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金圣功成

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

并且 跟质粒有很大关系 像是哪种质粒适合哪些宿主 用的启动子是什么 几个gfp拷贝等
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生活不可能像你想象得那么好，但也不会像你想象得那么糟。我觉得人的脆弱和坚强都超乎自己的想象。有时，我可能脆弱得一句话就泪流满面，有时，也发现自己咬着牙
6楼2016-05-26 11:14:19
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hw5697

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
18716248350: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-05-27 12:25:59
我之前做过的是lac启动子后面接GFP报告基因。PUC18上改造的。摇到平台期后，荧光能保存很久。你可以试试。
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7楼2016-05-26 16:28:34
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 金圣功成 at 2016-05-26 11:12:23
看不看的到荧光 是表没表达的问题，有的转进菌体cell了 PCR也有 但不表达就看不到。而且荧光要强才有利于下面的实验 。我放过菌液4°冰箱一个礼拜 还能看到 但是亮度明显下降了。楼主要记得在-80°备份咯

嗯嗯，谢谢。我的荧光就是不是很强，所以很担心放久了荧光就不在了！我放了一部分加甘油保存了-80，那个应该能放很久吧？

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8楼2016-05-26 23:48:44
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18716248350

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hw5697 at 2016-05-26 16:28:34
我之前做过的是lac启动子后面接GFP报告基因。PUC18上改造的。摇到平台期后，荧光能保存很久。你可以试试。

好的谢谢

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9楼2016-05-26 23:49:06
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IrisSchubert

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hw5697 at 2016-05-26 16:28:34
我之前做过的是lac启动子后面接GFP报告基因。PUC18上改造的。摇到平台期后，荧光能保存很久。你可以试试。

请问PUC18在革兰氏阴性菌中都能高表达吗？我是做黄单胞的，想转GFP，但是不知道通用的表达载体在黄单胞中表达效果如何，怕转完荧光效果不明显。
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10楼2016-10-12 09:40:01
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