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叶小虫10

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19楼: Originally posted by shanyoufeng at 2016-05-24 07:26:48
就是没连接成功，你的高保真酶和载体是否可以？比如说，酶具有连接A尾功能，而载体又是T载体。祝好！

用的是平末端的，是不是连接时间太短，我按照说明书上的连接的

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21楼2016-05-24 09:29:39

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叶小虫10

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18楼: Originally posted by 18463102708 at 2016-05-23 23:26:52
图在前面

这个条带大的是连上了是吧

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22楼2016-05-24 09:30:51

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draco1987

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

你连接用的片段用什么方法回收的？片段回收质量怎么样？一般都是切胶回收、测浓度纯度之后再决定是否连接。
这个载体是平末端连接的，你扩增片段用的酶会不会加A尾？
转化之后培养用的筛选平板抗性是不是对的，抗生素会不会失效了，这个载体我记得貌似是Amp和Km双抗性都可以的，你可以试试换另一个抗性的平板筛选。
另外，建议别用通用引物做PCR检测，直接用自己的特异引物检测，这样判断结果会准确方便点。

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23楼2016-05-24 10:26:10

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kshdd

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24楼2016-05-24 10:58:39

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