| 查看: 2212 | 回复: 5 | ||||
[交流]
sephadex G50使用前怎么处理 已有3人参与
|
|
sephadex G50使用前该怎么处理，是只需90℃水浴煮1h后脱气就可以装柱了吗 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
疑惑？
已经有5人回复
-
国自然申请面上模板最新2026版出了吗？
已经有14人回复
-
计算机、0854电子信息（085401-058412）调剂
已经有5人回复
-
基金委咋了？2026年的指南还没有出来？
已经有3人回复
-
Materials Today Chemistry审稿周期
已经有5人回复
-
溴的反应液脱色
已经有7人回复
-
推荐一本书
已经有12人回复
-
基金申报
已经有4人回复
-
纳米粒子粒径的测量
已经有7人回复
-
常年博士招收(双一流，工科)
已经有4人回复
wlt728
铁杆木虫 (著名写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 38 (小学生)
- 金币: 13652.1
- 散金: 977
- 红花: 5
- 沙发: 1
- 帖子: 2130
- 在线: 344.5小时
- 虫号: 275024
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 抗体工程学
2楼2016-05-19 06:44:26
3楼2016-05-19 14:27:35
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 462.9
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.8小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
1.化学和物理性质 葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。 葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。另外，粗级也可用于批量工艺。 2.化学稳定性 葡聚糖凝胶不溶于一切溶剂(除非它被化学降解)。它在水、盐溶液、有机溶剂、碱和弱酸性溶液中都是稳定的，在强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解。长期接触氧化剂将破坏凝胶，因而应避免使用。 3.物理稳定性 葡聚糖凝胶并不熔融，可以在湿态、中性PH进行灭菌或在高压灭菌器120℃、30分钟而不影响它的色谱性质。干态的凝胶加热至120℃以上将开始焦糖化。葡聚糖凝胶的机械强度取决于交联度。 4.葡聚糖凝胶柱的使用方法： (1) 预处理 称取Sephadex G-25（50－100目）约5g，加入蒸馏水100ml，置室温下3h进行溶胀。 (2)装柱 凝胶层析柱的直径与柱长之比一般为1:15。柱的底部用装有细玻璃管的橡皮塞塞紧，用洗净的玻璃丝（约200目尼龙布）垫底或购买类似规格的商品柱。然后将柱垂直安装好，先加入1/3柱体积蒸馏水，接着将溶胀好的凝胶边搅匀边连续装入，使它们在柱内自然沉降。同时大开下口慢速流出蒸馏水。装柱后的凝胶必须均匀，不能有气泡或明显条纹。否则，必须到出重装，装好后，用蒸馏水平衡2－3h即可加样品分离。 (3)加样 加样前，首先把柱内凝胶上面多余的蒸馏水放出，直到柱内液面与凝胶表面相齐（或留一极薄液层）为止。然后，由柱的上端加水解液2ml，注意不要让溶液把凝胶冲松浮起，加完样品后，打开下口缓慢放出液体至液面与凝胶面相齐，再用少量蒸馏水冲洗原来盛样品的容器2－3次，待全部进入层析柱后，即可进行洗脱。 (4)洗脱与收集 洗脱时，用蒸馏水作洗脱剂，并且要连续不断地进行，使凝胶柱上端保持一定的液层，防止凝胶柱表面的液体流干。本实验洗脱液流出的速度应控制在0.8－1.0ml/min。洗脱液的收集采用分管连续顺序收集，每管收集3ml，共收集10管。据经验，4或5号管核苷酸浓度最大，可作为层析鉴定的样品液。但因层析柱长度的差异，管号会有变化，必要时可用紫外检测A260nm，找出浓度最大的管号。 (5)凝胶的再生和回收 凝胶柱使用一次后，必须反冲疏松一次，平衡后再使用。若使用数次，就需要再生处理。用0.1mol/L NaOH-0.5mol/L NaCl溶液浸泡，然后用蒸馏水洗至中性备用。若实验完毕，将再生后的凝胶在布氏漏斗上用蒸馏水洗涤抽干，再用95%乙醇洗两次，在60℃烘箱中烘干，回收保存。 祝顺利 |
4楼2016-05-20 11:03:50
Liumengya
木虫 (正式写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 3166.8
- 散金: 539
- 红花: 11
- 帖子: 917
- 在线: 360.2小时
- 虫号: 4380921
- 注册: 2016-01-26
- 专业: 生物信息学
5楼2016-05-21 21:40:03
6楼2016-05-27 05:47:34