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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » anti-flag m2 affinity gel洗脱问题
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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100楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-13 15:19:27
你怎么知道目的蛋白很多 你肉眼看到的beads上的东西一般都是没洗干净的脂质
...

我煮了洗脱之后的beads，western blot检测发现上面还有大量的目的蛋白

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104楼2016-05-13 15:54:03
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dailywish

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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104楼: Originally posted by 弑者星魂 at 2016-05-13 15:54:03
我煮了洗脱之后的beads，western blot检测发现上面还有大量的目的蛋白
...

peptides 买的是sigma的吗， 实在不行只能用 洗脱液-0.1 M Glycine, pH 3.5
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109楼2016-05-13 16:46:52
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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109楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-13 16:46:52
peptides 买的是sigma的吗， 实在不行只能用 洗脱液-0.1 M Glycine, pH 3.5...

(⊙o⊙)…我先用那个方法洗脱的，没洗脱下来，才买的3×flagpeptide

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110楼2016-05-13 17:00:18
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dailywish

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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110楼: Originally posted by 弑者星魂 at 2016-05-13 17:00:18
(⊙o⊙)…我先用那个方法洗脱的，没洗脱下来，才买的3×flagpeptide
...

要不你在peptide溶液中多加点盐离子，比如tbs中的Nacl为600mM试试吧， 其他的我也不知道了
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111楼2016-05-13 17:15:14
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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111楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-13 17:15:14
要不你在peptide溶液中多加点盐离子，比如tbs中的Nacl为600mM试试吧， 其他的我也不知道了...

嗯嗯，多谢你了

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112楼2016-05-13 17:24:34
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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111楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-13 17:15:14
要不你在peptide溶液中多加点盐离子，比如tbs中的Nacl为600mM试试吧， 其他的我也不知道了...

你当时纯化后洗脱的效果怎么样

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113楼2016-05-13 17:25:57
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dailywish

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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113楼: Originally posted by 弑者星魂 at 2016-05-13 17:25:57
你当时纯化后洗脱的效果怎么样
...

我觉得特别好洗脱 不过我做的是转染后的细胞

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114楼2016-05-13 19:19:24
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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114楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-13 19:19:24
我觉得特别好洗脱 不过我做的是转染后的细胞
...

那个你是完全按照说明书的药品和步骤来的吗，beads和3×flag的说明书不太一样，你参照的那个

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115楼2016-05-13 19:26:22
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dailywish

木虫 (正式写手)
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115楼: Originally posted by 弑者星魂 at 2016-05-13 19:26:22
那个你是完全按照说明书的药品和步骤来的吗，beads和3×flag的说明书不太一样，你参照的那个
...

我是按照sigma上的那个 flag-m2 gel 的说明书做的
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116楼2016-05-13 20:46:12
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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116楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-13 20:46:12
我是按照sigma上的那个 flag-m2 gel 的说明书做的...

哦哦

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117楼2016-05-13 21:18:47
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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116楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-13 20:46:12
我是按照sigma上的那个 flag-m2 gel 的说明书做的...

不好意思，还有一件事要问你，你是怎么处理洗脱的那30min，就是你shaking的条件，是用的混匀器还是

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118楼2016-05-13 22:35:47
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dailywish

木虫 (正式写手)
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118楼: Originally posted by 弑者星魂 at 2016-05-13 22:35:47
不好意思，还有一件事要问你，你是怎么处理洗脱的那30min，就是你shaking的条件，是用的混匀器还是
...

360度旋转的摇床

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119楼2016-05-13 23:13:21
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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119楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-13 23:13:21
360度旋转的摇床
...

100ul的3×flag peptide和beads这样能充分混匀吗，你是在EP管里做的吗，我这样做的时候液体和beads只存在底部，你是让他竖直旋转还是水平旋转

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120楼2016-05-14 09:24:19
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dailywish

木虫 (正式写手)
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120楼: Originally posted by 弑者星魂 at 2016-05-14 09:24:19
100ul的3×flag peptide和beads这样能充分混匀吗，你是在EP管里做的吗，我这样做的时候液体和beads只存在底部，你是让他竖直旋转还是水平旋转
...

ep管竖直旋转
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121楼2016-05-14 10:37:47
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
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121楼: Originally posted by dailywish at 2016-05-14 10:37:47
ep管竖直旋转...

有混匀效果吗，感觉beads和液体都不动

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122楼2016-05-14 14:12:05
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dailywish

木虫 (正式写手)
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122楼: Originally posted by 弑者星魂 at 2016-05-14 14:12:05
有混匀效果吗，感觉beads和液体都不动
...

速度快的话可以

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123楼2016-05-14 22:47:29
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Bang嘉

新虫 (初入文坛)
★
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请问现在有答案了吗
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124楼2018-10-12 22:38:17
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Bang嘉

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那个我最近也遇到了peptide无法富集我的目的蛋白。虽然也有蛋白洗脱下来了，但是和input相比，没有达到富集的效果。不知道楼主的问题解决的如何，还望指教
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125楼2018-10-12 22:41:35
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狐狸尾巴101楼
2016-05-13 15:21   回复  
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豆豆要读研102楼
2016-05-13 15:46   回复  
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xueshen103楼
2016-05-13 15:49   回复  
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未来的回音105楼
2016-05-13 15:55   回复  
弑者星魂(金币+1): 谢谢参与
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葫芦打呼噜106楼
2016-05-13 16:12   回复  
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moliut107楼
2016-05-13 16:25   回复  
弑者星魂(金币+1): 谢谢参与
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1259181809108楼
2016-05-13 16:28   回复  
弑者星魂(金币+1): 谢谢参与
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