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圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] 1373-bp和1434-bp 的mRNA 序列用质粒转化大肠杆菌,会不会很难有活性?

将1373-bp 、1434-bp 的mRNA 序列用质粒转化大肠杆菌,来表达出新的蛋白来用于生产。可是听说太大的转化进去后会大量复制而形成包涵体,使这个表达的蛋白失活,想问如果1373-bp 、1434-bp 的mRNA转进去会不会也很容易失活形成包涵体?
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
圆加leaf: 金币+5 2016-05-09 17:14:50
你的mRNA是这么长,具体编码区是多长呢?表达产物是否形成包涵体与你使用的大肠杆菌株系、表达载体类型,表达方式(融合表达还是独立表达)、诱导表达条件等因素有关。
2楼2016-05-09 16:42:03
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圆加leaf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-09 16:42:03
你的mRNA是这么长,具体编码区是多长呢?表达产物是否形成包涵体与你使用的大肠杆菌株系、表达载体类型,表达方式(融合表达还是独立表达)、诱导表达条件等因素有关。

编码区也有1200bp. 用的是BL21(DE), pET23d。这样呢?
3楼2016-05-09 17:16:20
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sunguangchao

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-05-10 08:51:23
圆加leaf: 金币+5 2016-05-11 09:08:25
为什么不转基因片段,如果需要用于生产,我建议你就用一个带constitutive promoter 的载体,把基因ORF 融合上去然后转到大肠杆菌, 你转mRNA有太多不确定因素,另外由于RNA太不稳定,转化过程中是否有突变都很难控制。
仍然自由自我,永远高唱我歌,走遍千里
4楼2016-05-10 05:27:34
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xzl_0633

木虫 (著名写手)

学以致用
5楼2016-05-10 06:16:34
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圆加leaf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by sunguangchao at 2016-05-10 05:27:34
为什么不转基因片段,如果需要用于生产,我建议你就用一个带constitutive promoter 的载体,把基因ORF 融合上去然后转到大肠杆菌, 你转mRNA有太多不确定因素,另外由于RNA太不稳定,转化过程中是否有突变都很难控制 ...

是啊,其实就是用这个mRNA 序列做个DNA转入质粒载体,再转到大肠杆菌,就是怕这段基因太大,会最终导致在大肠杆菌表达过快,变包涵体而失活
6楼2016-05-11 09:10:46
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sunguangchao

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 圆加leaf at 2016-05-11 09:10:46
是啊,其实就是用这个mRNA 序列做个DNA转入质粒载体,再转到大肠杆菌,就是怕这段基因太大,会最终导致在大肠杆菌表达过快,变包涵体而失活...

恩, 我曾经也遇到过基因过大直接导致大肠杆菌死亡的,如果你遇到这种情况,我建议你在表达载体的时候用低温培养大肠杆菌,25℃
仍然自由自我,永远高唱我歌,走遍千里
7楼2016-05-12 01:58:06
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