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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 1373-bp和1434-bp 的mRNA 序列用质粒转化大肠杆菌，会不会很难有活性？
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圆加leaf

新虫 (小有名气)

[交流] 1373-bp和1434-bp 的mRNA 序列用质粒转化大肠杆菌，会不会很难有活性？

将1373-bp 、1434-bp 的mRNA 序列用质粒转化大肠杆菌，来表达出新的蛋白来用于生产。可是听说太大的转化进去后会大量复制而形成包涵体，使这个表达的蛋白失活，想问如果1373-bp 、1434-bp 的mRNA转进去会不会也很容易失活形成包涵体？
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1楼 2016-05-09 15:48:39
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
圆加leaf: 金币+5 2016-05-09 17:14:50
你的mRNA是这么长，具体编码区是多长呢？表达产物是否形成包涵体与你使用的大肠杆菌株系、表达载体类型，表达方式（融合表达还是独立表达）、诱导表达条件等因素有关。
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2楼2016-05-09 16:42:03
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圆加leaf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-09 16:42:03
你的mRNA是这么长，具体编码区是多长呢？表达产物是否形成包涵体与你使用的大肠杆菌株系、表达载体类型，表达方式（融合表达还是独立表达）、诱导表达条件等因素有关。

编码区也有1200bp. 用的是BL21(DE)， pET23d。这样呢？
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3楼2016-05-09 17:16:20
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sunguangchao

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-05-10 08:51:23
圆加leaf: 金币+5 2016-05-11 09:08:25
为什么不转基因片段，如果需要用于生产，我建议你就用一个带constitutive promoter 的载体，把基因ORF 融合上去然后转到大肠杆菌， 你转mRNA有太多不确定因素，另外由于RNA太不稳定，转化过程中是否有突变都很难控制。
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仍然自由自我，永远高唱我歌，走遍千里
4楼2016-05-10 05:27:34
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xzl_0633

木虫 (著名写手)
学习

发自小木虫IOS客户端
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学以致用
5楼2016-05-10 06:16:34
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圆加leaf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sunguangchao at 2016-05-10 05:27:34
为什么不转基因片段，如果需要用于生产，我建议你就用一个带constitutive promoter 的载体，把基因ORF 融合上去然后转到大肠杆菌， 你转mRNA有太多不确定因素，另外由于RNA太不稳定，转化过程中是否有突变都很难控制 ...

是啊，其实就是用这个mRNA 序列做个DNA转入质粒载体，再转到大肠杆菌，就是怕这段基因太大，会最终导致在大肠杆菌表达过快，变包涵体而失活
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6楼2016-05-11 09:10:46
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sunguangchao

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 圆加leaf at 2016-05-11 09:10:46
是啊，其实就是用这个mRNA 序列做个DNA转入质粒载体，再转到大肠杆菌，就是怕这段基因太大，会最终导致在大肠杆菌表达过快，变包涵体而失活...

恩， 我曾经也遇到过基因过大直接导致大肠杆菌死亡的，如果你遇到这种情况，我建议你在表达载体的时候用低温培养大肠杆菌，25℃
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仍然自由自我，永远高唱我歌，走遍千里
7楼2016-05-12 01:58:06
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