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chrisdonkey金虫 (小有名气)
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[交流]
请教透射电镜细胞样品制备过程中的具体问题
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身在一个微生物学实验室，却做的都是细胞生物学的实验，没有前人经验可参考，只好来论坛请教各位朋友了。T_T 现在在准备透射电镜的样品，传代培养的HepG2细胞，在10cm皿培养后，固定收集，然后做超薄切片。在操作过程中遇到一些细节上的问题，还请各位朋友多多赐教。 1，固定液的量。 PBS润洗后，我向10cm平皿内加入5ml固定液，这个量合适吗？ 2，刮除细胞的时候需不需要将固定液全部吸除再刮？ 手头只有一个大致的步骤：4度固定30min后用细胞刮轻轻刮出细胞并转移到离心管内。 请问刮除细胞的时候是带着固定液一起刮，然后把细胞和固定液一起转入1.5ml EP管，还是把固定液去除后再刮细胞，将细胞转入1.5ml EP管，然后再加入固定液继续固定2小时？ 因为加入的固定液多于1.5ml，所以如果连带固定液一起转入离心管的话需要分两次离心，这样会不会对细胞造成影响？ 发自小木虫IOS客户端 |
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