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chrisdonkey金虫 (小有名气)
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[交流]
请教透射电镜细胞样品制备过程中的具体问题
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身在一个微生物学实验室,却做的都是细胞生物学的实验,没有前人经验可参考,只好来论坛请教各位朋友了。T_T 现在在准备透射电镜的样品,传代培养的HepG2细胞,在10cm皿培养后,固定收集,然后做超薄切片。在操作过程中遇到一些细节上的问题,还请各位朋友多多赐教。 1,固定液的量。 PBS润洗后,我向10cm平皿内加入5ml固定液,这个量合适吗? 2,刮除细胞的时候需不需要将固定液全部吸除再刮? 手头只有一个大致的步骤:4度固定30min后用细胞刮轻轻刮出细胞并转移到离心管内。 请问刮除细胞的时候是带着固定液一起刮,然后把细胞和固定液一起转入1.5ml EP管,还是把固定液去除后再刮细胞,将细胞转入1.5ml EP管,然后再加入固定液继续固定2小时? 因为加入的固定液多于1.5ml,所以如果连带固定液一起转入离心管的话需要分两次离心,这样会不会对细胞造成影响? 发自小木虫IOS客户端 |
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