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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白质浓度怎么测定呢
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pph0259

木虫 (正式写手)
蛋白含量测定：
Bradford贮存液：100 ml 95%乙醇，200 ml 88%磷酸，350 mg 考马斯亮蓝G-250。室温下长期保持稳定。
Bradford工作液：425 ml双蒸水，15 ml 95%乙醇，30 ml 85%磷酸，30 ml Bradford贮存液，Whatman 1号滤纸过滤，置于棕色瓶中，保存于室温，可使用数周，但在使用前要再过滤。


用Bradford法测定蛋白质浓度，以牛血清白蛋白作为标准蛋白，配制成1 mg/ml标准溶液，选择2.5 ~20 g的不同用量，定容至100 l，然后加入1 ml Bradford工作液并振荡混匀，在2 min后在595 nm处测定吸收值，测量应在1 h内完成。线性回归后得到吸光度-BSA量标准曲线为：
y = 0.0291x + 0.0383          R2 = 0.9999
x-BSA (g)                  y-吸光度A595               
样品检测同上法，用适当稀释样品代替牛血清白蛋白，测量待测样品的A595，从BSA标准曲线中确定待测样品的浓度。




[ Last edited by pph0259 on 2008-10-30 at 19:55 ]
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11楼2008-10-30 19:54:02
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周晓丽

酪蛋白溶液可保存几天？
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12楼2008-10-30 21:15:45
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周晓丽

多谢，我还想问一下那个标准曲线方程是怎么得出来的呀？我每天都要测样品，每测一个样都要从新绘制吗？
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13楼2008-10-30 21:21:24
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coffee424907

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 周晓丽 at 2008-10-30 14:36:
我要测胃液中胃蛋白酶活性，需要绘一个标准曲线，我一天杀四只鸡，测每只鸡都要从做一次标准曲线吗

幸福的研究工作
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14楼2008-10-30 22:52:53
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smallcat227

木虫 (著名写手)
标准曲线，严格说来是要每次做实验都单独绘制的，但实际上没必要这么严格吧，那些温度、湿度、个人心情等等的影响在要求不是很严格的情况下还是可以忽略的……

我们也是用考马斯亮蓝法，简单嘛，用牛血清蛋白（BSA）做标线
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15楼2008-10-30 23:08:40
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asbghj

在一天内完成，应该不需要每次都作标准曲线的吧
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16楼2008-10-31 09:52:42
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周晓丽

酶稀释倍数问题

我需要从胃食糜中提取胃蛋白酶，但我离心后没有消化液，如果先加点蒸馏水再离心，我又担心计算酶活性时，稀释倍数好如何计算。能否再举个例子。
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17楼2008-10-31 13:14:45
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