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蛋黄派

银虫 (小有名气)

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注册: 2008-09-25
性别: GG
专业: 催化化学

[交流] 蛋白质浓度怎么测定呢

用紫外吸收280nm测定蛋白质浓度，可是溶液中有另外一种物质在260nm处有最大吸收峰，这样行吗，会有很大的误差么

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让化学更精确

1楼 2008-10-29 10:34:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

pph0259

木虫 (正式写手)

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注册: 2008-02-11
专业: 微生物生理与生物化学

蛋白含量测定：
Bradford贮存液：100 ml 95%乙醇，200 ml 88%磷酸，350 mg 考马斯亮蓝G-250。室温下长期保持稳定。
Bradford工作液：425 ml双蒸水，15 ml 95%乙醇，30 ml 85%磷酸，30 ml Bradford贮存液，Whatman 1号滤纸过滤，置于棕色瓶中，保存于室温，可使用数周，但在使用前要再过滤。

用Bradford法测定蛋白质浓度，以牛血清白蛋白作为标准蛋白，配制成1 mg/ml标准溶液，选择2.5 ~20 g的不同用量，定容至100 l，然后加入1 ml Bradford工作液并振荡混匀，在2 min后在595 nm处测定吸收值，测量应在1 h内完成。线性回归后得到吸光度-BSA量标准曲线为：
y = 0.0291x + 0.0383 R2 = 0.9999
x-BSA (g) y-吸光度A595
样品检测同上法，用适当稀释样品代替牛血清白蛋白，测量待测样品的A595，从BSA标准曲线中确定待测样品的浓度。