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大肠杆菌高效生产的基因表达 已有2人参与
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大肠杆菌表达系统是基因表达技术发展最早的、目前应用广泛的经典表达系统。 要达到总蛋白20%以上的重组蛋白，不仅需要高效地表达系统，还要对系统进行良好的控制。表达外源蛋白所需要的能量和相当比例代谢流转向合成目标代谢对细胞来首是个负担，不利于细胞自身生长代谢。因此，根据为神武发酵的通用原则，将生长和产物合成分为两个连续的阶段，在第一阶段将细胞培养到希望的密度，但并不启动编码目标蛋白的表达；在第二阶段诱导表达重组基因，使产为大量合成。对前述所说工作必须有完善的基因表达技术。 一、载体（细胞/大肠杆菌）和表达系统 理想的大肠杆菌表达系统具备稳定的遗传复制、传代能力；易于筛选标记；启动子的转录是可控的，无诱导信号时不转录或转录水平很低；转录形成的mRNA能够在适当位置终止，并且转录过程不影响载体的复制有正常生长；具备适用于外源基因插如的酶切位点。 常规表达系统：lac、tac 、PL、PR、t7等表达系统。 |
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