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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助蛋白纯化
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shzdx

银虫 (初入文坛)

[交流] 求助蛋白纯化

我是初次做蛋白纯化工作，用sephadex G-50,缓冲液用0.9%的氯化钠，想进一步做液相色谱，但现在有一个问题，低温冻干后出现大量的盐，也不知道对我的目的蛋白有没有影响，请问各位高手，在低温冻干前能不能做一下除盐工作（我的目的蛋白4.8kD)。我听实验室的师兄说可以先用丙酮沉淀一下，不知道有没有人做过相应的工作。请高手赐教。谢谢！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:10 ]
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1楼 2008-10-28 12:24:19
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zengfuxing

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
shzdx(金币+5,VIP+0):谢谢你，
4.8kDa的蛋白根据我的经验脱盐柱效果不是很好。
我用的是透析袋，截留分子量1kDa的，生工就有卖。
感觉效果很好，丙酮沉淀不推荐。
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6楼2008-10-28 17:46:12
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hanjun80

金虫 (正式写手)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论 ~~
1, 分子筛层析可以除盐；
2, 除盐也可以用半透膜透析；
3, 丙酮会使蛋白变性（除非是非常低的温度），除盐效果也不好。
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我笃信:人定胜天！
2楼2008-10-28 12:41:40
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weiying11099

木虫 (著名写手)
★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论 ~~
看你的蛋白最后要做什么用途。如果crystalize就需要用柱子除盐，过FPLC也可以。
一般我在冻蛋白之前先除好盐。
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3楼2008-10-28 13:00:20
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
最好用脱盐柱脱盐,呵呵
我也用凝胶过滤脱过盐
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5楼2008-10-28 15:55:45
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