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Wendyxin

新虫 (初入文坛)

[求助] Sds page电泳遇到的众多问题和疑问,希望有好心人可以帮忙解答。

做这个做了一个月了,都没有跑出东西来,刚开始自己步骤错了,后来改正后还是没用。我先提出我的一些疑问,染色后,凝胶是全部都是蓝色的吗,我做的时候能看到一条条竖带。我的分离胶是12%,然后用去离子水封胶。样品上样量为20微升,mark为5微升,其他空的泳道为10微升上样缓冲液(这个不小心加多了,老师说只要2,3微升就好)。刚开始电压设为80v,但电流只有10mA。然后转为120v,电流在15mA左右。并且电流一直在下降,由于没有完全跑完(原因在下面),总共用时5小时。没跑完是因为,我中途离开一段时间,回来后不知道跑到哪里了。分离胶有一部分都染成了蓝色,不是一条横线了。而且样品进入分离胶前为大约1cm宽的横条(浓缩胶面积已经很多了)。跑完的图和脱色后的图如下。   希望各位大神帮忙分析下,苦恼了好久了。   老师也找不到原因。   主要困惑在为什么我的会跑这么久时间,电流为何会这么低。

Sds page电泳遇到的众多问题和疑问,希望有好心人可以帮忙解答。


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@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan 发自小木虫Android客户端
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jiayuan-jy

金虫 (初入文坛)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-06-20 07:40:32
你的蛋白质Mrker都没有跑出来,你的蛋白质上样之前煮沸了吗?在染色前分离胶底部有一条蓝色条带,其他部分都是透明的。染色后这条蓝色的带变为黄色,其他部分都染成了蓝色。用考马斯G250染色一小时后再脱色就会出来条带的。
2楼2016-06-19 20:10:55
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Wraky

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by jiayuan-jy at 2016-06-19 20:10:55
你的蛋白质Mrker都没有跑出来,你的蛋白质上样之前煮沸了吗?在染色前分离胶底部有一条蓝色条带,其他部分都是透明的。染色后这条蓝色的带变为黄色,其他部分都染成了蓝色。用考马斯G250染色一小时后再脱色就会出来 ...

都是用g250么,r250可以么

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3楼2017-08-04 08:23:44
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