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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 酵母宿主蛋白检测实验中宿主蛋白的制备
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jusperchan

银虫 (初入文坛)

[求助] 酵母宿主蛋白检测实验中宿主蛋白的制备 已有1人参与

从毕赤酵母中表达了一种蛋白，纯化之后，想检测一下最终样品中宿主蛋白残留。
购买了毕赤酵母HCP检测试剂盒，里面自带了宿主蛋白溶液用来做标准曲线用的，但是想自己做一个宿主蛋白的样品，定量之后用来做标准曲线。
一开始使用超声反复冻融，加硫胺沉淀，离心溶解沉淀，结果测A280/A260将近0.5，核酸太多。
用了生工的酵母蛋白提取试剂盒，最终蛋白溶于试剂盒中的“低渗液”中，用水透析之后，A280/A260比值倒是在1.8左右，但是用紫外吸光法和Bradford法测的结果相差太大，紫外吸光测的浓度非常大，怀疑是低渗液中有某种东西影响了紫外吸光法。。

问题是：不知道有没有人自己制备过毕赤酵母的全蛋白，最好不含其他杂质，对下一步的ELISA检测HCP没有影响的方法。
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1楼 2016-04-27 16:07:13
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小木蠢

木虫 (小有名气)

王哥
你好，我是用大肠杆菌表达了一种蛋白，然后用于酶催化反应，也是想检测一下产品中蛋白残留，请提供些建议，不胜感激！
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我学习我快乐!
2楼2016-05-14 09:32:54
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生物百科助手

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

市场上不是有大肠杆菌宿主蛋白残留试剂盒吗？我之前发酵葡萄糖脱氢酶，表达系统也是大肠杆菌，我买的试剂盒是glorybio的，给你推荐下
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3楼2016-05-24 15:13:46
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