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酵母宿主蛋白检测实验中宿主蛋白的制备 已有1人参与
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从毕赤酵母中表达了一种蛋白，纯化之后，想检测一下最终样品中宿主蛋白残留。 购买了毕赤酵母HCP检测试剂盒，里面自带了宿主蛋白溶液用来做标准曲线用的，但是想自己做一个宿主蛋白的样品，定量之后用来做标准曲线。 一开始使用超声反复冻融，加硫胺沉淀，离心溶解沉淀，结果测A280/A260将近0.5，核酸太多。 用了生工的酵母蛋白提取试剂盒，最终蛋白溶于试剂盒中的“低渗液”中，用水透析之后，A280/A260比值倒是在1.8左右，但是用紫外吸光法和Bradford法测的结果相差太大，紫外吸光测的浓度非常大，怀疑是低渗液中有某种东西影响了紫外吸光法。。 问题是：不知道有没有人自己制备过毕赤酵母的全蛋白，最好不含其他杂质，对下一步的ELISA检测HCP没有影响的方法。 |
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