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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 植物愈伤组织总RNA提取结果
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香雪1311

新虫 (初入文坛)

[求助] 植物愈伤组织总RNA提取结果 已有3人参与

最近在做植物的愈伤组织总RNA提取，用的是TIANGEN的总RNA试剂盒，跑的电泳图如下，但是测浓度和峰值后郁闷了，求高手指点~~
10管样品的260/280大概都在1.2-1.7，260/230在1.2-1.6，简直疯掉！！！（之前也提过几次，260/280值在1.8-2.1之间，这次不知道怎么了，瞬间懵掉）
RNA浓度测定都是700ng/微升左右，电泳上样0.5微升，180V跑了20min。
想请教下各位有经验的前辈：
1.是不是有机试剂残留的原因？
2.我能不能用异丙醇或者无水乙醇把RNA重新沉淀一下，去掉杂质？如果可以，请问有没有这么做过的大神能分享下经验的？
3.我的RNA是做cDNA-AFLP用的，下一步打算做个mRNA的纯化，用的是上海生工纯化mRNA的试剂盒，过Oligo（dT）吸附柱，想问如果是试剂残留会对下一步纯化mRNA构成影响吗？
4.请问有用过上海生工纯化mRNA的试剂盒的大神吗？你们纯化前的总RNA起始用量是多少？那个说明上好像要0.5mg，感觉太多了……
新手金币有限，请各位见谅，但是感谢的心意仍然是满满的，期待您的答复，拜谢！

植物愈伤组织总RNA提取结果
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1楼 2016-04-26 01:20:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
香雪1311: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢，我试试 2016-04-27 22:36:30
香雪1311: 金币+2 2016-05-01 22:45:58
样点多了而已，稀释后再跑胶试试，RNA应该没问题

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4楼2016-04-26 10:57:23
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jackyoung

新虫 (正式写手)
基本判定没有降解，单杂质偏多，有可能是有机试剂污染，从拖尾来看应该不是乙醇，后续因为需要反转录可以用酒精沉淀一下，方法如下:（1.氯仿抽提，2.终浓度70%乙醇+0.3M NaOAc置-20℃沉淀30+min或过夜后离心，3.70%酒精漂洗●根据总RNA量决定操作方式●后离心收集沉淀，晾干后溶于DEPC水）

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CestLaVie
6楼2016-04-28 00:21:42
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普通回帖

段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫
降解了么

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2楼2016-04-26 05:11:08
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卡维斯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的照片光圈参数太高了不是太清楚，但是我看还是还可以的。我们提取玉米愈伤一般是用CTAB法，CTAB是自己配置的，然后提取质量还是可以的。
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3楼2016-04-26 10:44:17
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皈依bi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
感觉太亮了吧，应该提的没问题。。
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5楼2016-04-27 22:30:04
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香雪1311

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jackyoung at 2016-04-28 00:21:42
基本判定没有降解，单杂质偏多，有可能是有机试剂污染，从拖尾来看应该不是乙醇，后续因为需要反转录可以用酒精沉淀一下，方法如下:（1.氯仿抽提，2.终浓度70%乙醇+0.3M NaOAc置-20℃沉淀30+min或过夜后离心，3.70% ...

非常感谢！
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7楼2016-04-28 23:51:27
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香雪1311

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-04-26 10:44:17
你的照片光圈参数太高了不是太清楚，但是我看还是还可以的。我们提取玉米愈伤一般是用CTAB法，CTAB是自己配置的，然后提取质量还是可以的。

谢谢！
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8楼2016-04-28 23:58:27
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jackyoung

新虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 香雪1311 at 2016-04-28 23:58:27
谢谢！...

我们都用改进版的方法，CTAB有点儿老了………

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CestLaVie
9楼2016-04-29 00:04:56
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香雪1311

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jackyoung at 2016-04-29 00:04:56
我们都用改进版的方法，CTAB有点儿老了………
...

我用的是试剂盒。之前用别人的TRIZOL试剂试验过，效果不行
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10楼2016-05-01 22:44:59
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