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植物愈伤组织总RNA提取结果 已有3人参与
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最近在做植物的愈伤组织总RNA提取，用的是TIANGEN的总RNA试剂盒，跑的电泳图如下，但是测浓度和峰值后郁闷了，求高手指点~~ 10管样品的260/280大概都在1.2-1.7，260/230在1.2-1.6，简直疯掉！！！（之前也提过几次，260/280值在1.8-2.1之间，这次不知道怎么了，瞬间懵掉  ）RNA浓度测定都是700ng/微升左右，电泳上样0.5微升，180V跑了20min。 想请教下各位有经验的前辈： 1.是不是有机试剂残留的原因？ 2.我能不能用异丙醇或者无水乙醇把RNA重新沉淀一下，去掉杂质？如果可以，请问有没有这么做过的大神能分享下经验的？ 3.我的RNA是做cDNA-AFLP用的，下一步打算做个mRNA的纯化，用的是上海生工纯化mRNA的试剂盒，过Oligo（dT）吸附柱，想问如果是试剂残留会对下一步纯化mRNA构成影响吗？ 4.请问有用过上海生工纯化mRNA的试剂盒的大神吗？你们纯化前的总RNA起始用量是多少？那个说明上好像要0.5mg，感觉太多了…… 新手金币有限，请各位见谅，但是感谢的心意仍然是满满的，期待您的答复，拜谢！  0424.JPG |
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Neo2000
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【答案】应助回帖
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样点多了而已，稀释后再跑胶试试，RNA应该没问题 发自小木虫Android客户端 |
4楼2016-04-26 10:57:23
jackyoung
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基本判定没有降解，单杂质偏多，有可能是有机试剂污染，从拖尾来看应该不是乙醇，后续因为需要反转录可以用酒精沉淀一下，方法如下:（1.氯仿抽提，2.终浓度70%乙醇+0.3M NaOAc置-20℃沉淀30+min或过夜后离心，3.70%酒精漂洗●根据总RNA量决定操作方式●后离心收集沉淀，晾干后溶于DEPC水） 发自小木虫Android客户端 |
6楼2016-04-28 00:21:42
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jackyoung
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