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playboy723金虫 (正式写手)
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[交流]
请教关于包涵体酶切的问题
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各位虫友好：我用pet-32a纯化出几个蛋白，但遇到了几个问题，望高手不吝赐教 谢谢了 首先是我需要用肠激酶切掉载体上的额外表达的蛋白， 但由于我的目的蛋白可能对菌体有毒副作用 所以目的蛋白基本都以包涵体的形式存在（我修改过诱导条件，没有用的），我用6M盐酸胍纯化出目的蛋白后发现肠激酶好像切不开 所以是否盐酸胍对肠激酶有抑制作用呢？如果有的话我该怎么解决呢 这些额外蛋白必须得切掉的 否则影响蛋白功能。 其次我想请问一下大家用咪唑洗脱下的目的蛋白能不能直接用于下游的细胞和动物试验呢？因为我不确信咪唑对细胞或者蛋白的功能有没有不利的影响，大家有做过的吗 或者说是正确的做法是怎样的，我以前没做过这些 而且周围也没有师兄师姐做过这个 希望大家不吝赐教。 最好是有一个完整的protocol 我愿高价求得 呵呵 |
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