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小鹿3姐

新虫 (初入文坛)

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[交流] 引物问题已有4人参与

我设计了一对引物上游是A下游是B，现在我想再扩增长一点，让下游B继续做下游引物，但在B的后面设计一条上游C，B和C两个来扩增，可以吗？

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juliet6303

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1楼 2016-04-07 11:43:02

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juliet6303

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

11楼: Originally posted by 小鹿3姐 at 2016-04-07 18:00:13
可是为什么B就只能朝3‘端呢，把双链反过来不是BC也一样了吗...

以下转自维基百科：
DNA链是具有方向性的，对于DNA的一条单链来说，它的两个末端分别被命名为“3'端”和“5'端”。DNA两条单链的结构之所以被描述为“反向平行双螺旋”，其中的“反向”即指两条单链中，一条链的方向是从3'端到5'端，而另一条则相反，是从5’端到3’端。5和3指的是在一个脱氧核糖中连接着相邻的磷酸基团的两个碳原子。方向性对于DNA合成有重要的意义，因为在DNA合成的过程中，DNA聚合酶只能向3'端的方向添加新的脱氧核糖核苷酸。

DNA中两条链的碱基是通过氢键连接实现一一配对的，这意味着一个DNA中的两条单链都包含着完全相同的信息。这样，一条单链中的核苷酸可以用来重建互补链中预期相对的核苷酸。

所以，回到你的问题，把B和C都反过来，可以做PCR，理论上也能扩增出片段，但是，序列是彻底反的，是反向不互补，还是方向性问题；如果实在不想重新合成引物，PCR产物后续也不作其他实验的话，可以做，也可以测序，结果，反过来就是了。

不知你明白了没有，画个图看看就知道了