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羧肽酶测酶活的问题
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我现在在做羧肽酶,刚接触这个,不是很了解。 这是我查到的测羧肽酶A的步骤:底物为马尿酰-L-苯基丙氨酸,测定浓度为10-3mol/L。缓冲液为0.025mol/L Tris-HCl,pH 7.65(含0.1mol/L NaCl),反应温度为25℃。反应体系2.9ml加入酶液100μl后,立即摇匀校正零点开始计时。在254nm测其吸收度增值,每隔30s读数一次,每分钟光密度增加0.001定为一个酶活力单位。 有几个问题: 第一,反应温度为25℃,这是指在进行测定之前对反应体系进行预热么。 第二,加入酶液后立即摇匀校正零点,是摇匀后马上校正还是稍微等等。 第三,加入酶液后OD值很高,大约在1.4左右,对测定有没有影响?还是需要稀释酶液? 各位大神,求帮助! |
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