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羧肽酶测酶活的问题
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我现在在做羧肽酶，刚接触这个，不是很了解。 这是我查到的测羧肽酶A的步骤：底物为马尿酰-L-苯基丙氨酸，测定浓度为10-3mol/L。缓冲液为0.025mol/L Tris-HCl，pH 7.65（含0.1mol/L NaCl），反应温度为25℃。反应体系2.9ml加入酶液100μl后，立即摇匀校正零点开始计时。在254nm测其吸收度增值，每隔30s读数一次，每分钟光密度增加0.001定为一个酶活力单位。 有几个问题： 第一，反应温度为25℃，这是指在进行测定之前对反应体系进行预热么。 第二，加入酶液后立即摇匀校正零点，是摇匀后马上校正还是稍微等等。 第三，加入酶液后OD值很高，大约在1.4左右，对测定有没有影响？还是需要稀释酶液？ 各位大神，求帮助！ |
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