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新手将做免疫荧光，请教几个问题，谢谢赐教！
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大家好，近期打算做免疫荧光相关的实验，查阅了一些资料，也在论坛看过大家的一些经验。由于实验室没有做过相关实验的，在此请教大家几个比较细节的问题，多谢大家了！ 1.做海马的免疫荧光，如果冰冻切片的话，用4%多聚甲醛前固定后，再后固定效果会比较好？但后固定的时间众说纷纭，这是所在实验室的经验吗？40min 2h 4h 24h的都有。还是可以新鲜组织可以不固定直接液氮固定后切呢？ 2.4%多聚甲醛前固定后，大家是用什么容器存放脑组织进行后固定呢？是EP管，还是离心管，还是那种药品玻璃瓶？或者有什么建议？ 3.对于多聚甲醛固定后，容易出现的自发荧光是如何处理的？抗荧光淬灭剂大家是用的什么的效果会比较好？ 4.冰冻切片的厚度切多少的比较好？选用的含FITC的二抗，观察时用什么显微镜效果更好？ 5.冰冻切片的话是不需要抗原修复的过程吗？那通透呢？ 6.封片时大家做的用什么效果比较好？还是可以直接用抗荧光淬灭剂封片？ 目前先请教这几个问题，谢谢耐心解答！看到帖子的各位如有做脑组织免疫荧光的相关经验建议，还望赐教，多谢！ |
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