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feiadafeng

银虫 (小有名气)

[求助] MTS实验,MTS不变色 已有1人参与

最近进行悬浮Daudi细胞的细胞毒性实验,购买了Promega的MTS 250 mg。
称取80mg溶于Hyclone 的PBS里,发现2mg/mL的浓度下仍有大量粉末未溶解。溶液呈现金黄色。避光超声并置于室温约4小时仍无改善。补加PBS至约50mL后0.22um滤膜过滤,感觉并未出现堵膜的情况。随后避光保存在-20度下。
使用时100uL培养基加20 uLMTS, 37度4小时,但是无论阴性对照还是阳性对照都是金黄色,也就是MTS没有明显变色。铺板前已确认细胞生存率>90%,每孔10000个细胞,培养基正常,培养箱内同批细胞生存率>85%生长曲线正常,而且同批MTS 与9.6*10^6的细胞混合会明显变色成偏血清的颜色。
综上所述,似乎并不是细胞死了或者MTS失效的问题,但不清楚为何MTS不变色。浓度是略低于2mg/mL,但是否影响这么大?
希望大家如果有经验的话指正一下或者解释一下,谢谢~
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euaomte

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感觉是不是10000个细胞每孔是不是太多了,建议1000个细胞每空铺板,这样可能效果会好点。
既然选择了自己的路,即使跪着也要走完.
2楼2016-08-04 10:07:57
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