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如何利用家蚕的提取物快速检测真菌和细菌感染
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——肽聚糖和(1→3)-β-葡聚糖定量检测 家蚕的淋巴有一种自我保护机制，被称为“酚氧化酶原串联反应”。当受外界入侵（如细菌和真菌）时，这个串联反应参与黑色素的形成并使机体免受攻击。这个反应由细菌中的肽聚糖或是真菌、酵母中的(1→3)-β-葡聚糖引发，该反应中的酚氧化酶原被激活。也有人认为丝氨酸蛋白酶也参与了该反应，但是没有从这方面阐述的资料。已消毒的SLP包括了所有参与该反应的因子，再生后的溶液中含有L-3,4-二羟基苯丙氨酸(L-3,4-dihydroxyphenylalanine, DOPA)，该物质可以作为肽葡聚糖或β-葡聚糖所激发的酚氧化酶的底物，DOPA被酚氧化酶氧化，形成黑色素。肽聚糖是绝大多数细菌细胞壁的组成成分，而β-葡聚糖广泛的分布于真菌的细胞壁中。因此，SLP通过测定黑色素的形成情况，进而定性或定量检测细菌污染。 特点： 1. 用于肽聚糖和(1→3)-β-葡聚糖的定量检测，检测敏感。 2. 使用酶标仪或内毒素检测仪，能对肽葡聚糖和β-葡聚糖精确定量。 3. 不需任何特殊器械即可通过肉眼检测出细菌和真菌的污染。 4. 冻干SLP的在2-10℃至少可保存18个月。 肽葡聚糖或是(1→3)-β-葡聚糖能分别和被称为PGRP或βGRP的反应识别蛋白相偶联。酚氧化酶原转化为酚氧化酶。然后，酚氧化酶催化DOPA氧化，同时，反应液中产生黑色素。过一段时间(约1h)，可通过肉眼判断反应混合物的颜色变化；反应液中有黑色素生成的为阳性，其它的为阴性。 当使用酶标仪或内毒素检测仪时，通过测定反应的始动时间和由颜色变化而导致的吸光度的变化，即可对肽葡聚糖或β-葡聚糖进行定量。 常见使用说明： 1.因为SLP是被PG（肽聚糖）或BG[(1→3)-β-葡聚糖]所引发，在操作和使用本试剂时，单一灭菌器皿或者用无热源器皿都不够的，必须还要同时无PG和BG； 2.如果是用玻璃器皿，清洗干净后，需要在250度下干热灭菌2小时； 3.如果是一次性无菌器皿，在使用之前必须进行测试能否适用于此项检测（即注1）； 4.如果使用过后还有剩余，我们认为其很可能被样品污染，不建议继续使用。以前我们也遇到类似的问题，但所有的都是因为污染造成。如果用户一定要保留一些SLP溶液，建议在未使用前进行无菌分装并0-4℃保存；最好是将SLP冻干粉 如需更多产品操作指导说明，欢迎联系探讨！ 上海西宝生物科技有限公司 联系人：魏莱 电话：021-50272975, 76, 77, 78转分机6212 传真：021-50272982 E－mail:tech@cxbio.com Http: www.cxbio.com [search]真菌和细菌感染快速检测[/search] |
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