[求助] tricine-sds-page 电泳跑乳酸乳球菌发酵液中的Nisin总是跑不出怎么回事，结果还很诡异

各位大神，我最近在用tricine-sds-page跑小分子电泳，乳酸乳球菌发酵液中的Nisin，大小在3.5-5KD之间，发酵液经6倍浓缩了。但是跑了好多次都跑不出东西来，跑出来的结果还很诡异，感觉心好累啊╮(╯_╰)╭，谁能帮忙看一下吗 我沉淀蛋白的方法是用TCA法沉淀（新开封的TCA固体中加入227mL水配成100%的TCA溶液，用10%的TCA沉淀蛋白，后来我又做了个13%的），然后200ul冰丙酮洗2次。 胶浓度浓缩胶4%T、3%C，夹层胶10%T、3%C，16.5%T、3%C（加了尿素）。 几乎每次都是这样（如图），Maker跑的好好的，样品就是歪歪扭扭的，特别是我的发酵液样品，跑一路下来都是那些东西，在最底下不知道是些什么，有可能是没脱色干净吧，但是整块胶我都脱的差不多了~(╯﹏╰)。 我猜测可能是蛋白处理方面的问题，在网上看到说TCA若没处理干净可能会酸解蛋白（我每次沉淀完蛋白后溶解，蛋白都是棕色的，而且加了上样缓冲液之后变成了黄色或绿色），所以我用丙酮好好地洗了三次，溶解后的蛋白溶液颜色没那么深了，加了上样缓冲液也没有变黄，结果跑出来是这样的 样品泳道看上去是不脏了，但是下面的到底是有还是没有啊？？？感觉好诡异 现在我什么方法都想了，~~~~(>_<~~~~我还浓缩了8倍和10倍的，结果都差不多，心好累，谁能帮我看一下

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