24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 819  |  回复: 11
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 zhaoxiag 的 4 个金币

zhaoxiag

银虫 (小有名气)

[交流] 关于双酶切

求助:关于双酶切
        最近在构建一个质粒,大小约为7500bp左右,可以用BamH1和Xba1来酶切的,双酶切切出来的条带应该有一条是6500bp,还有一条是1000bp的,可是现在电泳图谱上就只能看见6500bp的那条条带,而1000bp的那条却找不着,另外用BamH1和Xba1来单独酶切时也都能看到7500bp的条带,而且做该质粒的菌液PCR扩增时是能清楚的看到1000bp的条带的。
       我试过先将构建的质粒用Xba1单独酶切后切胶回收用BamH1再酶切,也试过两者同时加入一个反应体系中双酶切(缓冲液是按照混合时的说明来的),但是最后都没有找到那个1000bp的条带。
      很急啊, 请问各位牛人这是怎么回事啊?我该怎么解决呢?在此拜谢了!

[ Last edited by zhaoxiag on 2008-10-21 at 23:04 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syd.zhang

金虫 (小有名气)


zhaoxiag(金币+1,VIP+0):谢谢了哦
没有图片,实在不好说
1000bp 的marker清晰不?加大酶切的量
实在不行,可以试试把1000bp条带附近的胶切下来,胶回收后再跑个PCR,看能不能扩出目的条带
2楼2008-10-22 00:04:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhongdianshi

银虫 (小有名气)


zhaoxiag(金币+1,VIP+0):谢谢啦
不知你现在切了多少的质粒,建议切1ug以上,直接双切。如果是要回收1000bp的片段,建议胶的浓度在1%。
引用回帖:
Originally posted by zhaoxiag at 2008-10-21 23:03:
求助:关于双酶切
        最近在构建一个质粒,大小约为7500bp左右,可以用BamH1和Xba1来酶切的,双酶切切出来的条带应该有一条是6500bp,还有一条是1000bp的,可是现在电泳图谱上就只能看见6500bp的那条条带, ...

3楼2008-10-22 06:55:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoxiag

银虫 (小有名气)

1000bp的条带不需要回收的,我只是想验证一下,然后好接着往下做
4楼2008-10-22 09:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryqpr

木虫 (正式写手)

小猪亲点的老公


zhaoxiag(金币+1,VIP+0):谢谢交流
如果要问清楚 最好吧你的胶片拍个照片传上来
顺便说一句 是不是跑胶时间太长 1000的带跑出去了?
铁杵可以磨成针,木杵只能磨成牙签,有些事情不是努力可以改变的.
5楼2008-10-23 18:40:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ningluztt

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
zhaoxiag(金币+3,VIP+0):非常感谢
如果酶切酶问题的话,建议你电泳时,加到酶切产物的上样量。原因如下:
对于酶切后的质粒,片段6500bp与1000bp的摩尔量是相等的,但是质量比却是6.5:1,当你能清楚的看到6500bp的片段时,假设是50ng,那么这时你的1000bp的量连10ng都不到,当然看不到1000bp的条带啦。
所以尝试加大电泳上样量吧。
好运
6楼2008-10-24 11:30:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoxiag

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ningluztt at 2008-10-24 11:30:
如果酶切酶问题的话,建议你电泳时,加到酶切产物的上样量。原因如下:
对于酶切后的质粒,片段6500bp与1000bp的摩尔量是相等的,但是质量比却是6.5:1,当你能清楚的看到6500bp的片段时,假设是50ng,那么这时你 ...

非常感谢哦
前几天我狠狠的加大了酶切反应体系中质粒的量,结果看到了1000bp的那条带了,
7楼2008-10-26 10:49:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


很好的讨论,我也遇到同样的问题。
8楼2008-10-26 13:22:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hihoney

铁杆木虫 (职业作家)


前几天我狠狠的加大了酶切反应体系中质粒的量,结果看到了1000bp的那条带了, [/quote]
加到多大?
9楼2008-10-27 14:07:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyhredmoon

根本没有连上吧 空载
10楼2008-10-27 16:22:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhaoxiag 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307求调剂 +8 超级伊昂大王 2026-03-24 9/450 2026-03-27 15:34 by 超级伊昂大王
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 277跪求调剂 +4 1915668 2026-03-27 5/250 2026-03-27 14:18 by 杨光于青云
[考研] 化学308分求调剂 +8 你好明天你好 2026-03-23 9/450 2026-03-27 14:01 by 杨光于青云
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工 264分各科过A区国家线 +10 哈哈157349 2026-03-21 10/500 2026-03-27 13:06 by zzll406
[考研] 材料求调剂 +8 @taotao 2026-03-21 8/400 2026-03-27 11:21 by wangjy2002
[考研] 一志愿郑大085600,310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:17 by guoweigw
[考研] 316求调剂 +5 江辞666 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:08 by hypershenger
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 机械学硕310分,数一英一,一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 0856求调剂 +8 zhn03 2026-03-25 9/450 2026-03-26 13:42 by zzll406
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 求调剂 +6 研研,接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
信息提示
请填处理意见