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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求大神帮忙！！！！！
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吕木木

新虫 (小有名气)

[交流] 求大神帮忙！！！！！

跑了一个学期，1800多的片段一直跑不出来，连目的条带都没有，怎么办啊，哪位大神帮设计一下引物，给点意见，用了高保真酶都不行，温度梯度，touchdown程序都跑了，酸豆没有

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1楼 2016-03-29 19:16:08
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451350853

金虫 (小有名气)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
模板浓度优化下
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2楼2016-03-29 19:44:53
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 451350853 at 2016-03-29 19:44:53
模板浓度优化下

我试着跑了中间的短片段，也跑出来了

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3楼2016-03-29 20:35:23
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 451350853 at 2016-03-29 19:44:53
模板浓度优化下

这个怎么优化啊，目的条带什么都没有

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4楼2016-03-29 20:36:00
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rfywoaini

银虫 (初入文坛)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
怎么会啊，咋的都应该有条带啊，有图么

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5楼2016-03-29 21:10:21
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by rfywoaini at 2016-03-29 21:10:21
怎么会啊，咋的都应该有条带啊，有图么

没有，但是只有引物二聚体，不用看图了

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6楼2016-03-29 22:57:17
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liuwen-55

新虫 (初入文坛)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
你blast一下试试，看看扩增片段和引物质量
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8楼2016-03-29 23:28:16
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rfywoaini

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 吕木木 at 2016-03-29 22:57:17
没有，但是只有引物二聚体，不用看图了
...

你用的酶系是混合酶还是，高保真酶特异性太强了，容易有引物二聚体。

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9楼2016-03-30 00:36:35
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zjsuiyuan

新虫 (初入文坛)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
连条带都没有，很可能是引物有问题，建议重新设计

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10楼2016-03-30 08:07:08
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star013

新虫 (知名作家)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
我们可以帮您做技术服务

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11楼2016-03-30 10:11:41
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summer200888

铁虫 (小有名气)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
你这是做什么啊？P1800的片段？
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12楼2016-03-30 15:10:44
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tbsjxy

铜虫 (小有名气)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
兄弟，你啥信息都没给怎么帮你啊，至少把引物序列贴出来啊，这种情况引物有问题的可能性最大，换一对引物试试呢~
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13楼2016-03-30 16:43:18
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王爱沫1

禁虫 (小有名气)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
本帖内容被屏蔽
14楼2016-03-30 17:06:19
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坚强的小蜗牛

新虫 (初入文坛)
★
吕木木(金币+1): 谢谢参与
用takara试剂盒试下

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15楼2016-03-30 17:14:58
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by summer200888 at 2016-03-30 15:10:44
你这是做什么啊？P1800的片段？

是的

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16楼2016-04-03 22:10:20
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by tbsjxy at 2016-03-30 16:43:18
兄弟，你啥信息都没给怎么帮你啊，至少把引物序列贴出来啊，这种情况引物有问题的可能性最大，换一对引物试试呢~

F:ATGGCTCTCAATCTGCGGCAA

R: TCACTGAGTTGAAGCAGCAGG

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17楼2016-04-03 22:13:14
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 吕木木 at 2016-04-03 22:13:14
F:ATGGCTCTCAATCTGCGGCAA
R: TCACTGAGTTGAAGCAGCAGG
...

F: ATGGCTCTCAATCTGCGGCAAAGGC
R: TCACTGAGTTGAAGCAGCAGGAGGA
能帮看看我这两对引物吗。一直用它们跑了很多程序

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18楼2016-04-03 22:14:41
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吕木木

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by tbsjxy at 2016-03-30 16:43:18
兄弟，你啥信息都没给怎么帮你啊，至少把引物序列贴出来啊，这种情况引物有问题的可能性最大，换一对引物试试呢~

F: ATGGCTCTCAATCTGCGGCAAAGGC
R: TCACTGAGTTGAAGCAGCAGGAGGA
能帮看看我这两对引物吗。一直用它们跑了很多程序

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19楼2016-04-03 22:15:06
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吕木木

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9楼: Originally posted by rfywoaini at 2016-03-30 00:36:35
你用的酶系是混合酶还是，高保真酶特异性太强了，容易有引物二聚体。
...

是GXL酶，但是只有二聚体，没有条带啊

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20楼2016-04-03 22:15:56
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吕木木

新虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by liuwen-55 at 2016-03-29 23:28:16
你blast一下试试，看看扩增片段和引物质量

扩增片段很特异，引物质量怎么看啊

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21楼2016-04-03 22:16:38
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赵亚南7楼
2016-03-29 23:21   回复  
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