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bingdong05

银虫 (正式写手)

[交流] 跪求 探针的浓度问题

本人最近在做southern 杂交,做了几次,都失败了。原因可能是探针浓度太低。
     开始设计探针时,探针长度共为107bp,由于太短,不能采用玻璃奶回收,只能利用跑胶后利用柱子回收。这样最后回收到的产物浓度太低,约0.02ug/ul。
     而用地高新标记探针时,其要求探针量为1ug,后稀释至16ul,再加标记物4ul,这样总体系为20ul,而我光探针的量就达到50ul。
      请各位高手指点下,有没有什么好的解决的办法。
谢谢!
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guohuayin

木虫 (著名写手)

博士,副教授

你制备好探针后是不要回收的,直接取1-2ul探针加入预热的杂交液中杂交过夜就行。 你可以适当的降低杂交温度。
内生菌资源和核酸分子的利用
2楼2008-10-21 12:35:54
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randomqd

木虫 (小有名气)

樱花骑士

一般是用20pM

不知道你是怎么标记的。。
随机还是末端?
探针多的话,做个检测跑个电泳看看,回收回来没有?
一般我们是用同位素杂交的。。
未来天空才是极限
3楼2008-10-21 14:20:10
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