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张小姐123

木虫 (小有名气)

[求助] 蛋白胶问题， 已有1人参与

相同浓度的蛋白而且处理方法一样，跑出来的蛋白胶为何有时条带深有时条带浅，求解啊。。。

蛋白胶问题，
FullSizeRender(237).jpg


蛋白胶问题，-1
FullSizeRender(165).jpg
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1楼 2016-03-28 09:36:24
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kop9831

金虫 (小有名气)
毕竟你上样的时候不可能蛋白量完全一致，枪头深入的深浅也是不一样的，样品煮完离心后浓度肯定是下面的高了，哪怕用排枪，每孔的体积也是有微小的差别的。
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比较擅长做图，尤其是SCI投稿用的，常用工具：PS、AI、Image-Pro、GraphpadPrism
2楼2016-03-28 14:52:57
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littlebiohit

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
张小姐123: 金币+5, ★有帮助 2016-03-31 09:55:31
成像时的曝光量，染脱色时间的长短以及上样时的残留都有可能导致你看到的灰度图不一样啊
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4楼2016-03-30 11:23:20
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张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kop9831 at 2016-03-28 14:52:57
毕竟你上样的时候不可能蛋白量完全一致，枪头深入的深浅也是不一样的，样品煮完离心后浓度肯定是下面的高了，哪怕用排枪，每孔的体积也是有微小的差别的。

但是微小的差异在胶上的差别这么明显嘛
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3楼2016-03-28 15:27:08
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xiaoning1979

铁虫 (初入文坛)
先定一下蛋白质含量，含量差太多的话，自然深浅区别大

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5楼2016-03-30 12:49:22
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harry007

新虫 (小有名气)
楼主说一下具体的处理方法嘛

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6楼2016-03-30 22:27:18
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张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xiaoning1979 at 2016-03-30 12:49:22
先定一下蛋白质含量，含量差太多的话，自然深浅区别大

谢谢你的回复啦，我的蛋白的量是一样的，是不是由于点样的时候蛋白从孔里出来了一些，导致上样量有差别
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7楼2016-03-31 09:53:24
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张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by littlebiohit at 2016-03-30 11:23:20
成像时的曝光量，染脱色时间的长短以及上样时的残留都有可能导致你看到的灰度图不一样啊

但是这些都不是完全可控制的因素啊，我只能保证染脱色时间差不多。
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8楼2016-03-31 09:55:08
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张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by harry007 at 2016-03-30 22:27:18
楼主说一下具体的处理方法嘛

蛋白0.5mg/ml,用考马斯亮蓝-R-250染色两小时，过夜脱色。
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9楼2016-03-31 09:56:50
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harry007

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 张小姐123 at 2016-03-31 09:56:50
蛋白0.5mg/ml,用考马斯亮蓝-R-250染色两小时，过夜脱色。...

哦哦 可能是你的蛋白定量方法的问题吧 虽然都是0.5但不同蛋白确实会有差异

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10楼2016-03-31 10:07:42
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