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植物种子中双氧水含量测定方法及20%四氯化钛浓盐酸配制方法
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以下资料参考均注明了来源，如果侵权，敬请告之，即可删帖。有点乱，希望能对做种子生理的童靴有所参考价值。欢迎回帖交流。 双氧水测定方法 1.2g叶片加入1ml冷藏的5%TCA和0.7g活性炭在研钵中加液氮磨碎 2.加7ml 5%TCA，混匀 3.18 000g 0℃ 离心10min，取上清液 4. 用17M氨溶液调整pH至8.4 5. 18 000g 0℃ 离心10min，取上清液（除去中和过程中产生的沉淀） 6.取1ml上清液加入1ml预热的反应液（当天配制，1.2mM 4-(2-pyridylazo) resorcinol （4-(2-吡啶基偶氮)间苯二酚）和1.2mM potassium titanium oxalate 等体积混合液，溶液中两种物质的最终体积为0.6mM）。 7. Reference： 1.1g叶片加入2ml丙酮 2.钛（20%氯化钛用浓盐酸配制）加入已知体积的提取液中（保证最终钛的浓度为2%） 3.在1ml提取液中加入0.2ml 17M氨来提取钛-双氧水复合物和未反应的钛 4.沉淀用丙酮通过再悬浮洗5遍，减少色素干扰。 5.在沉淀中加入3ml 2N（1M）硫酸溶解沉淀 6.测定A410 7.空白为不加叶片的处理，其他处理与同上。 N：当量浓度 参考： 备注：英文版与中文版是同样的内容 种子中双氧水测定方法简化20160314 1.0.05g种子加入0.5ml三氯乙酸冰浴研磨，4℃20 000g离心15min。 2.取上清液200ul 加入20ul 20%四氯化钛的浓盐酸溶液 混合均匀 3.410nm处测定吸光度 4.用0-1mM的双氧水制作标准曲线 根据样品吸光值对应的标准曲线求出双氧水的量。 参考： 双氧水标曲 1mM双氧水 蒸馏水 双氧水浓度（mM） 0 10 0 1 9 0.1mM 2 8 0.2 4 6 0.4 6 4 0.6 8 2 0.8 10 0 1mM 取200ul加入20ul 20%四氯化钛浓盐酸混合液 A410 问题：20%四氯化钛浓盐酸配制出现问题 用10ml的离心管配制 取2ml四氯化钛，准备分两次加入8ml浓盐酸，结果在刚刚加入约1ml浓盐酸时，就发生反应，生成黄色固体，最后黄色固体塞满整个离心管。 照片如下： 4 过氧化氢的四氯化钛分光光度法 4.1 原理 空气中的过氧化氢用含钛吸收液吸收，反应生成黄色化合物，在 410nm 波长下测量吸光度，进行定量。 4.2 仪器 4.2.1 大型气泡吸收管。 4.2.2 空气采样器， 0～3L/min。 4.2.3 刻度试管，10ml。 4.2.4 分光光度计。 4.3 试剂 实验用水为蒸馏水。 4.3.1 硫酸，ρ20＝1.84g/ml。 4.3.2 盐酸，ρ20＝1.18g/ml。 4.3.3 盐酸溶液：100ml 盐酸加入到900ml 水中。 4.3.4 钛试剂：在50ml 容量瓶中，加入10ml 盐酸溶液，称量后，加入约10g 四氯化钛（含量为99％），再称量，用盐酸溶液稀释至刻度。由两次称量之差计算钛的含量；再用盐酸溶液稀释成1ml含50mg钛的溶液。 疑问：可否用容量瓶，在盐酸中加入四氯化钛是否放热？可能会导致容量瓶爆炸。 4.3.5 吸收液：取20ml 钛试剂，加入400ml 盐酸溶液，用水稀释至1000ml，此溶液1ml 含1mg 钛。 4.3.6 标准溶液：取10ml 浓过氧化氢用水稀释至 150ml。 取出2.5ml 此液于250ml 锥形瓶中，加20ml硫酸溶液（1mol/L），用高锰酸钾溶液（0.2mol/L）滴定。根据高锰酸钾溶液的用量计算出过氧化氢的浓度。然后用刚煮沸放冷的水稀释成100g/ml 过氧化氢标准溶液。或用国家认可的标准溶液配制。 4.4 样品的采集、运输和保存 现场采样按照GBZ 159执行。 在采样点，用1只装有10.0ml 吸收液的大型气泡吸收管，以1L/min 流量采集空气样品，直到吸收液呈现淡黄色为止。 采样后，封闭试管进出气口，立即置清洁的容器内运输和保存。样品应在12h 内测定。 4.5 分析步骤 4.5.1 对照试验：将装有10.0ml 吸收液的大型气泡吸收管带至采样点，除不连接空气采样器采集空气样品外，其余操作同样品，作为样品的空白对照。 4.5.2 样品处理：用采过样的吸收管中的吸收液洗涤进气管3 次，并从进气管将吸收液吹入刻度试管中，混匀，供测定。若吸收液中过氧化氢浓度超过测定范围，可用吸收液稀释后测定，计算时乘以稀释倍数。 4.5.3 标准曲线的绘制：取6 只具塞比色管，分别加入0.00、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00ml 过氧化氢标准溶液，各加4.0ml 盐酸溶液和0.2ml 钛试剂，配成0.0、50.0、100.0、200.0、300.0、400.0g过氧化氢标准系列。用水稀释至10ml，摇匀后，在410nm 波长下测量吸光度。每个浓度重复测定3 次，以吸光度均值对相应的过氧化氢的含量（g）绘制标准曲线。 4.5.4 样品测定：用测定标准系列的操作直接测定样品溶液和空白对照溶液；样品的吸光度值减去空白对照的吸光度值后，由标准曲线得过氧化氢的含量（g）。 4.6 计算 4.6.1 按式（2）将采样体积换算成标准采样体积。 4.6.2 按公式（4）计算空气中过氧化氢的浓度： m C = ———— …… （4） Vo 式中：C － 空气中过氧化氢的浓度，mg/m3； m － 测得样品溶液中过氧化氢的含量，g； Vo － 标准采样体积，L。 4.6.3 时间加权平均容许浓度按GBZ 159规定计算。 4.7 说明 4.7.1 本法的检出限为1.2g/ml；最低检出浓度为0.8mg/m3（以采集15L空气样品计）。测定范围为1.2～40g/ml；平均相对标准偏差小于4.1％。 4.7.2 本法的采样效率为100％。 4.7.3 采样时，应注意观察吸收液颜色的变化。当吸收液开始变黄色，即可停止采样。 4.7.4 操作四氯化钛时，要在通风柜中进行；操作尽量迅速。 4.7.5 臭氧对本法有正干扰，低于3mg/m3 的二氧化硫不干扰本法。 解决方案： 1. 冰水浴，浓盐酸中溶解（四氯化钛，冰水浴，在浓盐酸中溶解） 2. 取四氯化钛的时候，可以用移液枪，迅速取，以防四氯化钛水解，生成二氧化钛，堵塞枪头。也可以用较粗的一次性注射器，操作迅速。 参考资料： 四氯化钛水解过程 参考：四氯化钛水解过程的研究—陈瑞澄 四氯化钛与水一接触就发生激烈反应，形成体积很大的黄色沉淀或者白色沉淀，并放出大量的反应热，黄色沉淀可溶于四氯化钛与水反应时生成的盐酸溶液，形成四氯化钛的盐酸水溶液。 3. 4. 100umol/L过氧化氢母液 5. 配制1L溶液 6. 双氧水的质量为：100umol*34g/mol=3400ug=3.4mg=3.4/1000 g 7. 30%双氧水的质量为=（3.4/1000）/30%=0.011g 8. 30%双氧水的体积为=0.011g/1.11g/ml =0.01 ml 9. 10. 配1L溶液，加入0.01ml=10ul 30% 的双氧水 11. |
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20%四氯化钛的浓盐酸溶液配制的时候，一定要是先加入80ml的浓盐酸，然后加入20ml四氯化钛，记得在通风厨中进行，因为这个过程会有大量的氯化氢气体产生，记得带口罩。即使这样，可能四氯化钛遇到空气中的水汽，也会产生黄色沉淀（初步认定，黄色沉淀为TiOCl2），这个黄色沉淀碰到浓盐酸，会快速溶解，得到四氯化钛的浓盐酸溶液（透明的黄色）。 我用这个四氯化钛溶液做了双氧水的标曲了。R2=0.9999 详见数据如下： H2O2(mM） A410 0 0.043400001 0.1 0.085299999 0.2 0.124799997 0.4 0.212200001 0.6 0.296200007 0.8 0.381599993 |
2楼2016-03-23 16:31:47