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关于胰蛋白酶测定酶活的问题
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这是我在文献里找到的测胰蛋白酶的步骤，以BApNA为底物： (1)试剂配制: ①1mol/LTris-HCl缓冲液(pH8.0): 称取三经甲基氨基甲烧(Tris) 121.14g,溶于900 mL水中,用浓盐酸调pH值到8.0,加水用容量瓶定容至1L,4°C保存,用时稀释 20 倍,制成 pH8.0、50mmol/L 的 Tris-HCl 缓冲液。 ②BApNA底物溶液: 称取0.0435g溶于10 mL 二甲基亚砜,4°C保存。 ③10%三氯乙酸: 10g三氯乙酸,溶于100 mL去离子水,4°C保存 (2)测定步骤: ①将50微升酶液溶入1850微升缓冲液中,混合均勾,并在37摄氏度下预热2min。 ②向上述混合液中加入100微升底物(20mmol/L),在37°C下反应20 min; ③反应时间结束,向反应体系中加入200微升三氯乙酸(10%)终止反应,对照管为预先先加入三氯乙酸(10%)破坏了酶活力的反应体系。 ④反应液冷却至室温,在波长为410nm的条件下测定其光吸收值。 每个样品设一个对照,三个平行样。我们将每秒钟转换1微摩尔底物BApNA所需的酶量定义为1个酶活力单位。 那么各位大神，测酶活的公式是什么？ |
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