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小秀子子

新虫 (初入文坛)

★ ★
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xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-04 06:48:30
可以适当延长酶切时间,确保酶切完全
11楼2016-03-31 20:20:33
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海忆梦奇

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你好!我想问问你,酶切位点是如何选择的?
12楼2016-04-27 10:45:01
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baishaoyun

新虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-04 06:48:47
引用回帖:
10楼: Originally posted by 想学好的学渣 at 2016-03-31 14:39:11
用他们公司的快切酶,最好不要用sal I那个酶。三个保护碱基够了。你要保证你插入的片段不会造成移码突变。另外载体和片段配比也要保证好。推荐全式金的原核表达的载体,用着还可以
...

为何尽量不用SAC I?

发自小木虫Android客户端
13楼2016-08-03 23:44:31
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小静儿000

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的实验也碰到了相同的问题,连了好久都没成功,后来实验室师兄教给我用同源重组的方法进行克隆,结果就连上了,而且目的片段不用酶切,直接把载体酶切之后用Dnp1酶消化一下就没有环状质粒了,不会有假阳性的,我用的是Vazyme的同源重组克隆试剂盒,你可以试试
14楼2016-08-04 10:15:50
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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)


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引用回帖:
14楼: Originally posted by 小静儿000 at 2016-08-04 10:15:50
我的实验也碰到了相同的问题,连了好久都没成功,后来实验室师兄教给我用同源重组的方法进行克隆,结果就连上了,而且目的片段不用酶切,直接把载体酶切之后用Dnp1酶消化一下就没有环状质粒了,不会有假阳性的,我用 ...

觉得同源重组的方法还是挺好的,连接效率会比较高
15楼2016-08-04 10:43:29
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swgcpy

至尊木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这么近的位点,可能会影响双酶切效率,可以先单酶切成线性,沉淀或者切胶回收,再次用另一个酶切,切胶回收

发自小木虫Android客户端
16楼2016-08-12 00:05:57
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踏云逐月

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
设置一个单酶切对照看看呗!
17楼2016-08-12 11:43:52
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korchagin

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
酶切是能切开的,但不应该用37度一刀切,建议先用低温切在调成高温切
18楼2016-08-12 15:16:50
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