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灰色彼得潘

金虫 (小有名气)

[求助] 色谱主峰分叉 已有5人参与

色谱柱:Thermo 的bds hypersil C-18柱(4.6*100,5um)
条件:缓冲液:甲醇=98:2—> 70:30  梯度洗脱
柱温25   流速1
今天做有关物质,进一针系统适用性后,样品主峰分叉了,后面重新配制流动相和系统,都出现主峰分叉情况,其他小的杂质峰峰型不错
色谱柱是新买的,之前做过一次同一物质的含量(条件:缓冲盐:甲醇=76:24  等度洗脱)
请问:
1.为什么会出现主峰分叉的情况?与前一次测含量有关系么?
2.柱子还能通过反冲或者再生重新恢复到能使用吗?
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忍冬1018

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
改用乙腈冲洗下,是否有杂质强保留在色谱柱上了。
另外流动相的pH是多少,如果在6.5以上,可能是造成了柱硅胶溶解和流失,你只能反着用了。
5楼2016-03-22 08:00:11
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忍冬1018

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

测测你的化合物的pH值或是有文献报道pKa值吗?也可能是你的流动相pH不合适,建议选择pKa±2的流动相pH进行试验。
11楼2016-03-23 08:29:02
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