[交流] RAW264.7 / mRFP-EGFP-LC3稳转细胞株

RAW264.7 / mRFP-EGFP-LC3稳转细胞株 质粒来源：Addgene # 21074 ( 载体pEGFP-C1+mRFP；插入基因 Rat LC3B，GenBank ID: U05784 ) 背景：自噬为机体在亚细胞水平的“自我吞噬”，可以帮助细胞维持自身稳态及适应应激环境。近年来，自噬已成为生物学领域中的一个研究热点。迄今研究发现，自噬可以参与多种疾病的发生发展，例如肿瘤，心血管疾病，神经退行性疾病等。因而，自噬在各类相关疾病研究中作为药物筛选靶点越来越受关注和讨论。自噬研究的基础是有效地观察，定量细胞中自噬的发生。而目前应用较为广泛的自噬检测方法为观察GFP-LC3荧光斑，细胞正常生理环境LC3呈弥散状分布，自噬激活时LC3会转移至自噬囊泡上，因此，GFP荧光的弥散或斑点状聚集可以比较准确的反应细胞状态。 由于分子生物学的发展，现在已经诞生了mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系，用于标记及追踪LC3以及自噬流的变化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是稳定的荧光表达基团，不受外界影响。由于自噬小体进入第二阶段后，与溶酶体进行融合，形成自噬溶酶体。自噬溶酶体由于溶酶体内部的酸性环境，可以导致PH下降，GFP淬灭，因此，GFP的减弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度，GFP越少，则从自噬小体到自噬溶酶体阶段流通得越顺畅。反之，自噬小体和溶酶体融合被抑制，自噬溶酶体进程受阻。mRFP是一直稳定表达的，因而可以通过GFP与mRFP的亮点比例来评价自噬流进程。 优点：mRFP-EGFP-LC3稳转细胞株可以稳定持续的表达mRFP-EGFP-LC3，能够有效地解决瞬转实验的效率低、周期长、操作繁琐、不稳定等问题，有利于保证实验结果稳定性与可重复性。mRFP-GFP-LC3 双荧光自噬指示体系的出现，把自噬研究带入了一个新的阶段，自噬不再只是指标，而是一种机制，自噬流的顺畅与否，对于细胞生理功能的稳定非常关键。 实验图片： RAW264.7 自噬图片.jpg

回复此楼

» 猜你喜欢

• 26申博（荧光探针方向，有机合成） 已经有4人回复
• 要不要辞职读博？ 已经有3人回复
• 论文终于录用啦！满足毕业条件了 已经有26人回复
• 2026年机械制造与材料应用国际会议 （ICMMMA 2026） 已经有4人回复
• 磺酰氟产物，毕不了业了！ 已经有6人回复
• 求助:我三月中下旬出站，青基依托单位怎么办？ 已经有9人回复
• Cas 72-43-5需要30g，定制合成，能接单的留言 已经有8人回复
• 北京211副教授，35岁，想重新出发，去国外做博后，怎么样？ 已经有8人回复
• 自荐读博 已经有3人回复
• 不自信的我 已经有5人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

高级回复