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农杆菌转化的问题
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新人第一次提问。我做的是番茄的转基因，将番茄基抗病基因OL、A8结合在pcam2300质粒上，导入农杆菌GV3101的感受态细胞，然后涂板培养(kan筛选)，A8的两个平板没有出现菌落，OL的两个平板出现了单菌落(一个平板上5个菌落，另一个只有一个菌落)，空白对照的平板(只有感受态细胞，没有导入质粒)没有菌落。于是我又做了一次实验，这次把kan浓度降低一半【100ml培养基只加了50ul】这次OL、A8和空白对照都出现了菌落(OL、空白组和一个A8的平板上面都是只有十几个菌落，另一个A8的平板上面有百十个菌落)，而且每个平板上都有两种不同的菌落，一种是小而白的，一种是稍微大一点而橘黄色的。第一次实验的平板被我保存在4度冰箱里【这时候已经过了一个星期】拿出来一看那五个菌落有四个变成大而橘黄色的了，只有一个菌落依然是小而白。不知道是什么情况？老师给我的农杆菌菌液，我用它划线培养，rif筛选，取单菌落做成菌液，然后做成感受态的，每一步摇菌都用rif筛选了，不应该有杂菌污染啊，而且如果菌有问题那我第一次做的那几个平板为什么只有一个长出来？如果kan有问题可是我带kan的lb固体培养基倒好平板以后放了好几天才用，如果kan里有菌在这段时间应该会长出来啊？ 发自小木虫Android客户端 |
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yvonne9044
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