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提取真菌胞内蛋白的方法
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请教各位高人，我想提取木霉的胞内活性蛋白，实验室没有试剂盒，按照几篇文献的方法如下提取： 1. PDA培养基培养3天 2. 300毫克蜗牛酶加入20mlPBS中，伴有DTT50微升，消化离心洗净的菌体5h 3. 将所得物低速离心，去上清，去除蜗牛酶 4. 将沉淀用尿素-碳酸钠溶液冰浴30min后震荡20min（因为尿素会让蛋白变性，而我需要活性蛋白，所以我将这步改为：冰水重悬沉淀，超声20min，8秒间隔，震荡8S） 5. 将所得物低速离心，去除未破碎的菌体，上清理论上应该就是内蛋白 但上清跑蛋白胶后目标组和对照条带基本一致，没有区别，且看不出明显清晰的条带，这个方法明显不行，请问各位高人有什么办法，或者有什么有效的便宜点的试剂盒可以买的，多谢 |
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