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新虫 (初入文坛)

[交流] 培养基的保存方法

已经灭菌完毕的培养基从高压灭菌锅中取出后,立即放在平整的台面上,若大批量生产可用果箱装好并标记好其用选后,送到接种室,让其自然冷却凝固。灭好的培养基最好经过3d的预培养,以便观察培养基是否彻底灭菌,这样能够使某些因为没有彻底灭菌的培养基,在接种前被检出,可避免杂菌污染而造成不必要的损失,这点对少而重要的材料尤其值得注意。但是在同等条件下经多次使用无污染后,就没必要再摆3d后才使用,而是冷却凝固后就可使用了。
我们公司(杭州睿凯干细胞生物科技有限公司http://www.stemcells-cn.com/shouye-267410.html)在生产全合成细胞培养试剂(http://www.stemcells-cn.com/chanpinzhongxin-244374.html)时用的培养基保存方法如下:
(1)防尘
已经灭好菌的培养基要注意防尘。如果培养基在卫生条件差的地方贮存,依附在尘埃中的细菌、真菌等会落在培养瓶表面,使用前若不进行表面灭菌处理,在接种时就容易随着气流进入容器,使其受到污染,影响组织培养工作的顺利进行,因此培养基必须放在干净、卫生的接种室内。
(2)避光
备用培养基应贮于光线较暗的房子里面,因为吲哚乙酸等某些物质易见光分解。在光照下,一些培养基添加物的成分也会发生变化。在接种室里挂上较厚的窗帘或在培养基的箱子上加盖厚的黑布,这样可以使培养基免受光线的影响。
(3)恒温
培养基冷却后,可以将其放在10℃左右的冰箱中贮藏3~5周;在大批量生产中可以放在装有空调的接种室内,摆放2周左右,温度控制在20℃以内;若摆放时间为2~5d,温度不超过28℃即可。但是在培养基摆放过程中温度不应过高,同时还应避免温度有较大幅度的变化,随着贮藏室气温的升高或降低,装有培养基容器内的空气会跟着膨胀或缩小,带来菌类进入培养基,造成贮藏期间培养基的大量污染。
(4)定期更新
培养基不宜长期贮存,特别是固体培养基。随着时间的推移,培养基里的水分以气态选出,培养基的含水量便逐渐降低,使培养基的浓度和理化性状发生改变,对以后的外植体培养或植株的继代转接及生根培养均不利;培养基贮存过长,空气中夹杂的细菌、真菌也可能降落到培养基表面引起污染;当贮藏含有吲哚乙酸、椰乳等物质的培养基时,环境中的光线会使吲哚乙酸发生光解,也会使椰乳所含的一些成分发生变化。因此结合生产任务做好培养基的配制和使用计划十分必要,一般情况下培养基贮存时间不应超过1周。
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