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[交流]
有没有人做过酵母的原生质体融合？
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酵母分单倍体和双倍体，在查阅原生质体融合的文献时发现有的文献是首先分离酵母的单倍体，然后以单倍体为出发菌，而有的文献则没有说明。 我想问做酵母原生质体融合必须得用单倍体么？还是都可以？ 有关单倍体分离的文章我查到的不多，也不是很了解，所以也不是很清楚具体如何获得单倍体。也望知道的虫子详细告知。 [search]酵母 单倍体[/search] |
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3楼2008-10-22 09:15:55
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shnzh(金币+1,VIP+0):谢谢告知制备单倍体的方法，但是原生质体融合是否一定要用单倍体呢？
shnzh(金币+1,VIP+0):谢谢告知制备单倍体的方法，但是原生质体融合是否一定要用单倍体呢？
| 利用营养细胞和子囊孢子的耐热性差异进行热处理，就能很容易得到单倍体细胞。具体做法是把二倍体营养细胞接种于产孢子培养基的斜面上，用5毫升无菌水制成悬浊液，将此悬浊液浸于55℃—60℃恒温水浴中，不断振荡处理约10分钟（处理时间，根据对营养细胞耐热性预备试验而定。一般以约106—107的营养细胞菌悬液经一定时间处理后，用接种环挑取一环菌液接种于完全平板或斜面，30℃培养2天后，看完全不生长或只有一两个菌落生长为标准作为所需的处理时间）。处理后，用自来水迅速冷却，适当稀释涂布于完全培养基平板，30℃培养2天后，用接种环挑取较小的圆锥形菌落镜检，从形态上判断单倍体细胞。用这方法，一般要划线纯化后较为可靠。为了进一步提高可靠性，可接种于产孢子培养基上看是否产孢子来确定。如先用一定浓度的纤维素酶处理，再进行热处理可提高获得单倍体细胞的效率。 |
2楼2008-10-17 21:40:59
