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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

[求助] 有做CT101载体连接转化的吗? 已有1人参与

做的材料是铁皮石斛 做到载体连接转化的时候就不行了 不知道是不是连接的时间 还有DNA加的量不对 就是不知道问题出在哪里了 醉醉的

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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是挑不到正确克隆么?还是压根没有转化子?

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天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-15 20:14:53
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

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2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-15 20:14:53
是挑不到正确克隆么?还是压根没有转化子?

根本没看到转化子 不知道哪里出了问题呢

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3楼2016-03-15 20:58:12
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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3楼: Originally posted by 丽姐萍妹 at 2016-03-15 20:58:12
根本没看到转化子 不知道哪里出了问题呢
...

转化的宿主是什么菌额,确定感受态效率没问题吧

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4楼2016-03-15 21:08:13
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

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4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-15 21:08:13
转化的宿主是什么菌额,确定感受态效率没问题吧
...

没呢 感受态是新买回来的

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5楼2016-03-16 06:26:22
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

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4楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-15 21:08:13
转化的宿主是什么菌额,确定感受态效率没问题吧
...

你们一般连接用多长时间啊?这个可不可能会影响到

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6楼2016-03-16 10:44:06
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 丽姐萍妹 at 2016-03-16 10:44:06
你们一般连接用多长时间啊?这个可不可能会影响到
...

连接我们一般两个小时左右吧,其实成功的关键是你目的基因和载体的处理效果,再有就是你转化的宿主是什么?遗传操作系统简单么,容易被转化么?

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7楼2016-03-16 11:57:25
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-16 11:57:25
连接我们一般两个小时左右吧,其实成功的关键是你目的基因和载体的处理效果,再有就是你转化的宿主是什么?遗传操作系统简单么,容易被转化么?
...

目的基因之前测过浓度了 还可以的 载体是CT101直接向公司购买的 宿主就是感受态咯 操作系统很简单啊 之前买来的载体上是说连接只要10分钟 后来我们又换了连接了一个小时 结果转化到感受态还是没表达 不懂啊

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8楼2016-03-16 13:22:54
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 丽姐萍妹 at 2016-03-16 13:22:54
目的基因之前测过浓度了 还可以的 载体是CT101直接向公司购买的 宿主就是感受态咯 操作系统很简单啊 之前买来的载体上是说连接只要10分钟 后来我们又换了连接了一个小时 结果转化到感受态还是没表达 不懂啊
...

额,目的基因浓度只是一方面,我指的处理好是说酶切是否完全,包括你的载体和片段都要尽量酶切完全,这样即使低浓度也可以有很好的连接效率。感受态也分好多种的,原核真核等等,所以有很多方面原因

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9楼2016-03-16 17:29:53
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-16 17:29:53
额,目的基因浓度只是一方面,我指的处理好是说酶切是否完全,包括你的载体和片段都要尽量酶切完全,这样即使低浓度也可以有很好的连接效率。感受态也分好多种的,原核真核等等,所以有很多方面原因
...

哦 好的吧

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10楼2016-03-16 19:25:52
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