24小时热门版块排行榜    

查看: 1767  |  回复: 20

xiong1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by mysw2006zhuo at 2016-03-14 16:09:53
我用的是纯水
...

我是用去离子水灭菌后溶解的,实验室师姐做PCR时也是这样做的没出现过我这种问题,到我这就一直出问题

发自小木虫Android客户端
11楼2016-03-14 16:11:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mysw2006zhuo

新虫 (初入文坛)

12楼2016-03-14 16:30:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiong1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by mysw2006zhuo at 2016-03-14 16:30:29
看样是提取RNA问题

谢谢!已经排除了问题了,主要出在引物上,现在的问题是在引物的稀释和保存上,大家都是怎么稀释的?

发自小木虫Android客户端
13楼2016-03-14 21:44:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiong1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 卡维斯 at 2016-03-14 08:45:05
RT-PCR由于使用的是cDNA所以操作过程应在冰上进行。
引物和cDNA都要注意降解问题,长时间不用放置在-20。
cDNA冰上融化后要混匀短离心再用。
适当调整两个循环参数,增加一两个试试。
重新提取RNA反转录。

谢谢啦!问题已经排除了,主要是引物没用了,你们又出现这种情况吗?引物用什么稀释才能稳定?

发自小木虫Android客户端
14楼2016-03-14 21:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mysw2006zhuo

新虫 (初入文坛)

没出现过,引物保存很简单,直接冻起来

发自小木虫Android客户端
15楼2016-03-14 21:51:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

卡维斯

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by xiong1990 at 2016-03-14 21:45:42
谢谢啦!问题已经排除了,主要是引物没用了,你们又出现这种情况吗?引物用什么稀释才能稳定?
...

灭菌ddH2o稀释,母液-20,工作液常用在4度,长时间不用-20或者再稀释
16楼2016-03-15 08:23:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MarchZR

银虫 (小有名气)

分子实验说不准,不过PCR就那几个组分,一个一个分析也没什么难的啊,
引物,模板,酶,dNTP,水,buffer
反应条件,镁离子,DMSO等,电泳胶等等。。。。
不过RT-PCR比较特殊,需要的灵敏度更高特异性也要更强,普通的酶操作要保持低温,就算是在冰上也很难避免非特异性产物,还是使用热启动Taq酶,保险一点,化学修饰的热启动Taq酶低温下能够完全抑制非特异性产物,RT-PCR起峰快,扩增特异性强,我们都是用热启动Taq酶扩增
17楼2016-03-15 16:24:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桂洁

新虫 (初入文坛)

18楼2016-03-15 16:54:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

星心的回忆

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
内参P出来,引物P不出来,怀疑是引物不好,建议换引物,之前也碰到过这种情况,重新合成没用,建议换引物吧,设计引物的时候注意下
19楼2016-03-16 17:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiong1990

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 桂洁 at 2016-03-15 16:54:52
是条带有拖尾现象吗?

没有拖带现象,什么都没有

发自小木虫Android客户端
20楼2016-03-17 13:01:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiong1990 的主题更新
信息提示
请填处理意见