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新手关于WB的问题~ 已有1人参与
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本人新手第一次做WB实验，有几个小问题，希望大家能解答下。 在做细胞提取的时候裂解液用的RIPA,而我测蛋白浓度用的是BRADFORD方法，我后来看说RIPA因为有SDS（我用的是浓度0.1%）不适合做Bradford法。我想问下如果我想用Bradford法，那么裂解液应该如何配？ 第二个是用Bradford法，为何要稀释蛋白样本的浓度，我第一次测的时候是测的纯量，没稀释，但是老师说我这个浓度太高，测不出来，要我稀释，但是我不太明白，怎么能看出来是浓度高，稀释的比例选多少合适呢？我们用的仪器，直接可以读出来UNKNOW 样本的浓度，然后在跑胶的时候，我需要保证每孔的蛋白质质量是一样的，那么我就需要保证我不同样本量蛋白浓度是一样的，老师给我的是2微克/微升，那么这个浓度有什么根据么，范围是在多少之内算合适的？ 第三是，我在最后拍照的时候，第一次曝光2分钟，是一片白的，相片上什么都没有，第二次曝光30分钟 是黑的一片，隐约能看见结果。我想问过黑或者过白是为什么？这个曝光时间该怎么掌握。。。 谢谢大家。。。因为在国外读博，有时候感觉老师解释的也不是很清楚。。。也可能是我理解能力不够。。。第一次WB做的感觉懵懵懂懂，似乎懂了，细想一下又一堆问题。。。 |
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