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rahmeli

新虫 (初入文坛)

[求助] ROS求助 已有1人参与

您好～前辈 我用的hek293细胞，培养于6孔板，细胞长到70%左右加入我的药品一种真菌毒素 5和7两个梯度。6h 后，细胞有微弱药效，抽掉孔中10%Dmem,加200微胰酶消化，细胞呈块落下后加10%deme终止消化。分别抽出到15ml离心管，2000转5min,抽出dmem 分别加1ml pbs。2000转5min。避光抽出pbs再各加浓度为25微摩的无血清Dcf孵育液2ml。锡纸包好放入37度培养箱，30min,每10min颠倒摇晃。30min后，2000转5min,抽掉孵育液后各加2ml PBS,2000转5min,抽出pbs再各加0.5ml pbs重悬转入流式管。请问有什么问题吗 为什么流式测出的峰，永远在一起，阳性对照（提前2h加入150微摩的过氧化氢）也测不出   有没有可能加药后探针载不进去 麻烦各位前辈啦～
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1楼 2016-03-04 21:55:17
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rahmeli

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by AZURESKY1999 at 2016-03-06 22:28:18
得首先按照试剂说明书操作，而且保证所设定的阳性对照和阴性对照结果是符合要求的，然后才能保证自己用药物干预后的结果是可靠的。就你所描述的情况看，探针没有装载进去的可能性大，可以考虑重新装载，装载探针的量 ...

谢谢您，可是我设了一个basal就是没有加探针孵育的孔，测出的值远在其他的峰之前，这样的话，还有可能是探针没进吗～如果真的是探针没进，又该在哪一步改进呢？谢谢前辈啦～
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3楼2016-03-07 15:25:44
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AZURESKY1999

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rahmeli: 金币+10 2016-03-07 15:19:48
得首先按照试剂说明书操作，而且保证所设定的阳性对照和阴性对照结果是符合要求的，然后才能保证自己用药物干预后的结果是可靠的。就你所描述的情况看，探针没有装载进去的可能性大，可以考虑重新装载，装载探针的量也是和细胞数量有关的，就是说让细胞的数量和探针的数量成一定比例，可以考虑设定不同总数的细胞和固定数量的探针，做前期预试验。
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rahmeli
2楼2016-03-06 22:28:18
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