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ken19860823

木虫 (正式写手)

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[交流] 在hiPSC里面做过cas9的T7EI实验的大佬过来指导下已有1人参与

本人2014年初接触iPSC相关的基因修饰项目，当时公司是用TALEN做的。我在14年中旬引入了cas9到我们实验室（找北京公司代买的质粒，ADDgene针对公司有点过了，我们这样小公司做点小科研买个质粒都买不到，真无语）。cas9比较方便吧，对于Talen来说原理简单，实验设计跟操作简化了很多，现在基本淘汰了TALEN。在做cas9的CELI实验的时候（也就是T7EI),首先我们也是找简单的做的，在HEK293T里面做的（因为转染效率高，我们实验室用的PEI转染的），跟张峰的文章图片有差异，我跟他唯一用的不同的是最后拍照我用的是普通国产紫外照胶仪，其他的什么试剂预制胶都是根据他的那篇Nat protocol来的，小公司他说的那些照胶仪器我没申请买。求做过的国内实验室大牛（有钱人）指导下，那个照胶仪是不是关键。图一是我最近做的几个位点的CELI图，图二是张峰实验室做的CELI图.做过的来指教，平时不怎么喜欢找论坛玩，觉得看文献做实验就行，现在觉得需要交流下，有时候一些小技术问题你也不可能去烦老板。cas9原理对于本人不重要，我基本当个酶来用，所以来指教我怎么用cas9的，请出门左转。想要学技术的，我就推荐个网站吧http://zlab.mit.edu/，不要来问我，我本科生。

图2.png