24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 3585  |  回复: 1

ken19860823

木虫 (正式写手)

[交流] 在hiPSC里面做过cas9的T7EI实验的大佬过来指导下已有1人参与

本人2014年初接触iPSC相关的基因修饰项目,当时公司是用TALEN做的。我在14年中旬引入了cas9到我们实验室(找北京公司代买的质粒,ADDgene针对公司有点过了,我们这样小公司做点小科研买个质粒都买不到,真无语)。cas9比较方便吧,对于Talen来说原理简单,实验设计跟操作简化了很多,现在基本淘汰了TALEN。在做cas9的CELI实验的时候(也就是T7EI),首先我们也是找简单的做的,在HEK293T里面做的(因为转染效率高,我们实验室用的PEI转染的),跟张峰的文章图片有差异,我跟他唯一用的不同的是最后拍照我用的是普通国产紫外照胶仪,其他的什么试剂预制胶都是根据他的那篇Nat protocol来的,小公司他说的那些照胶仪器我没申请买。求做过的国内实验室大牛(有钱人)指导下,那个照胶仪是不是关键。图一是我最近做的几个位点的CELI图,图二是张峰实验室做的CELI图.做过的来指教,平时不怎么喜欢找论坛玩,觉得看文献做实验就行,现在觉得需要交流下,有时候一些小技术问题你也不可能去烦老板。cas9原理对于本人不重要,我基本当个酶来用,所以来指教我怎么用cas9的,请出门左转。想要学技术的,我就推荐个网站吧http://zlab.mit.edu/,不要来问我,我本科生。

在hiPSC里面做过cas9的T7EI实验的大佬过来指导下
图2.png


在hiPSC里面做过cas9的T7EI实验的大佬过来指导下-1
图一.png
回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainontime

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问楼主找到原因了吗?marker左侧的是control吗?感觉也有一些被消化了,是T7EI的假阳性吗?谢谢。
2楼2018-04-17 14:28:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ken19860823 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见