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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌发酵OD值问题
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eleep

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌发酵OD值问题 已有3人参与

求助大神，制作重组大肠杆菌菌种，发酵。在制作种子的过程中，会用甘油保存种子供发酵使用，请问保存的时候种子的OD值为多少？
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1楼 2016-02-29 15:54:19
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨
直接刮斜面保藏就行了，干嘛用种子做甘油管保藏，用种子做甘油保藏稳定性不好吧？
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希望大家多多交流。
2楼2016-02-29 16:25:26
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hq0250

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张香玲1017 at 2016-02-29 16:25:26
直接刮斜面保藏就行了，干嘛用种子做甘油管保藏，用种子做甘油保藏稳定性不好吧？

请问斜面在多少度保藏呢？

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3楼2016-03-01 09:33:17
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张香玲1017

铁杆木虫 (著名写手)

冷夜雨
引用回帖:
3楼: Originally posted by hq0250 at 2016-03-01 09:33:17
请问斜面在多少度保藏呢？
...

我们一般都-20度保藏，可以随时拿来用的，如果想放置时间更长些就液氮保藏。
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希望大家多多交流。
4楼2016-03-01 10:38:10
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烟-城

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用30%甘油保存，一般在对数期，OD600为0.5.
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5楼2016-03-01 10:55:11
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hc2015

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般对数期，就是挑去单菌落，摇瓶培养至OD0.8左右（大概5个小时），然后吸取800vl菌液加到含有50%的200vl灭菌甘油中，负80度或负44度保存，加到甘油中，要轻摇混匀。甘油终浓度一般10%，甘油浓度太高不好。
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6楼2016-03-01 11:34:51
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eleep

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by hc2015 at 2016-03-01 11:34:51
一般对数期，就是挑去单菌落，摇瓶培养至OD0.8左右（大概5个小时），然后吸取800vl菌液加到含有50%的200vl灭菌甘油中，负80度或负44度保存，加到甘油中，要轻摇混匀。甘油终浓度一般10%，甘油浓度太高不好。

od测方法，我们是稀释6-8倍左右，波长600直接测？我们结果都6左右，是怎么回事，是因为测的方法不同吗

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7楼2016-03-01 22:21:32
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eleep

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 烟-城 at 2016-03-01 10:55:11
可以用30%甘油保存，一般在对数期，OD600为0.5.

你测OD方法有什么注意点吗

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8楼2016-03-01 22:22:14
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fudan671

木虫 (著名写手)
无所谓，肉眼浑浊就可以了
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9楼2016-03-02 08:45:15
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一刀do

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

在0.5-0.8之间，大约从平板上挑取单菌落，在LB培养基中培养2-2.5小时左右；
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10楼2016-03-03 16:51:19
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