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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)

[交流] RNA提取 已有4人参与

RNA提取之后通过电泳鉴定RNA的integrity，什么样的条带能说明提取的RNA有良好的integrity？

谢谢！！！
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1楼 2016-02-27 05:09:18
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prthefu

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2016-04-10 23:02:03
可以通过测A260/280和A260/230的比值。这两个比值有一个大概范围，如果那个区间，能说明RNA纯度较好。
跑电泳的话，理想的是出现三条带，对于5s、18s、28s。而且，28s比18s的条带亮一倍。
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nothing is impossible in this world，if you have the will to win，you can achieve anything
2楼2016-04-07 22:16:21
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by prthefu at 2016-04-07 09:16:21
可以通过测A260/280和A260/230的比值。这两个比值有一个大概范围，如果那个区间，能说明RNA纯度较好。
跑电泳的话，理想的是出现三条带，对于5s、18s、28s。而且，28s比18s的条带亮一倍。

我用普通的PCR agarose做的电泳，没有做变性电泳，60V跑一小时，但是只有一条带，这是什么原因啊，用的RNeasy mini kit，A260/A280一直在2左右，浓度也在100以上，loading buffer用的染DNA的，不知道什么原因
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3楼2016-04-08 00:49:20
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jianguochen

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
只有一个条带就看看大小，就算不做变性，RNA在电泳上也是有特定大小条带的嘛。至于260/280在2左右，说明纯度挺好，浓度的话，就算降解成小片段，检测浓度也一样的嘛。
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4楼2016-04-08 09:37:32
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jackchen129

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jianguochen at 2016-04-07 20:37:32
只有一个条带就看看大小，就算不做变性，RNA在电泳上也是有特定大小条带的嘛。至于260/280在2左右，说明纯度挺好，浓度的话，就算降解成小片段，检测浓度也一样的嘛。

刚看到一篇文章，Degradation of rRNA in Salmonella Strains: a Novel Mechanism To Regulate the Concentrations of rRNA and Ribosomes。

讲到细菌培养时间较长（到稳定期），培养五六个小时之后23sRNA90%以上就已经降解了。估计我用的是隔夜培养的细菌，所以十几个小时早就降解了，准备用五六个小时的细菌试试看
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5楼2016-04-08 10:32:15
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1yangz

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
单位采购多余QIAGEN的RNA提取试剂盒，包括52904和74104低价出售，另有gibco胎牛血清，Hyclone的细胞胰酶，抗生素，可有需要的？低价出售，可以顺丰到付

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6楼2016-04-10 01:18:49
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804371539

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
28s亮度是18s二倍，OD在2.0左右，没有DNA杂带
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7楼2016-04-10 17:51:14
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