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[求助]
关于细胞试验若干难题求助+有效期至2008年11月12日
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1、细胞总是出现流沙状污染，且时好时坏，请问是怎么回事？ 低倍镜下是黑色小点，像沙子一样，大小仅有细胞的百分之一左右；高倍镜下仿佛是很多小虫子在原地乱动，有点儿像逗号。培养液无异味。 以前加药筛贴壁细胞时出现过，以为是污染扔了了事。最近养两株师兄筛出的悬浮细胞，仅此两支不能再扔。自打复苏就出现非常多碎片和流沙状渣滓，后来移到96孔板并且加了G418，大部分孔里有细胞长起来，移到24孔板里和6孔板里也都能长的比较快，而且碎片非常少（由此判断应该不是细菌吧？），我以为污染已经去除，但移到25ml培养瓶里就又开始出现大量碎片。而且昨天6孔板里3孔细胞突然被流沙状的渣滓淹没，另3孔正常。请问有没有其他人遇到过类似情况？原因是什么？有个师兄说是黑胶虫，跟细胞伴生，细胞状态变差时会大量出现。是这样吗？那细胞还有救吗？ 2、培养杂交瘤细胞时，在10cm皿里还好，移到75ml培养瓶里就贴不上壁，细胞出现黑色渣滓，有时还聚团，但跟上面流沙状绝对不一样。我希望用培养液做western blot, 如何能使收集到的培养液上清含有较高抗体呢？我试过用含7.5%FBS的DMEM维持培养一周多，但培养液做western的效果还不如用10%FBS养三天。请指教 3、有谁知道，293细胞和u937细胞表达p16(CDKN2A)蛋白吗？水平有多高？ 4、做细胞转染时用的质粒要求很高吗？我用进口柱子提的质粒，电泳有三条亮度一致的带，而不是师姐提的一条高亮的带（超螺旋）加一条弱带（开环？） 。能用来做转染用吗？纯水溶的质粒，半年间反反复复冻融，后来屡次转染无效果，跑了电泳才发现已经几乎完全降解。反复冻融能导致质粒几乎完全降解吗？还是质粒本身就量非常低？我是拿师姐的那一套接着做的，当时也没重新检测。 （我还是只铁虫，金币有限，万一不够发的怎么办啊？版主能友情赠送回答问题的好心人么？） |
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