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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 重力柱纯化后保存一天变性了 都是沉淀
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善良的BL21

新虫 (小有名气)
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重力柱纯化后保存一天变性了 都是沉淀
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利用高密度发酵进行蛋白表达，重力柱纯化，可是放-80一天后，蛋白发生了变性，都成了沉淀，酶活也没有了。另外，由于菌体较多，我用了四天半才纯完，每天纯完的蛋白用冰盒放4°冰箱保存，全部弄完后才分装放在-80。难道是这几天放4°冰箱造成的？请教一下，多谢帮助。

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1楼2017-03-07 19:26:06
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绝对零度的笑

木虫 (正式写手)
★
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冻酶可以加少量甘油，防止蛋白变性失活
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15楼2017-03-08 00:07:14
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medi812

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
-80下蛋白很容易出现cold denature 你如果就用你纯化后的溶液 里面的盐在冰冻的过程中会瞬间浓缩几十倍 蛋白很有可能失活
你要保存蛋白 一方面要维持pH 同时盐度也很重要 楼上说甘油就不错，或者你也可以试试其他的盐 比如Histidine/His-Hcl 既能控制pH，又能保护蛋白 再加甘油 （或者再额外加少量的PS80） 应该可以稳定蛋白
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16楼2017-03-27 04:31:15
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qidaiyuanfen2楼
2017-03-07 19:26   回复  
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buaa_hw3楼
2017-03-07 19:26   回复  
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小小脑袋4楼
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镜子21805楼
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yiyilan6楼
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零点星辰7楼
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中华骄子8楼
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高校实验测试9楼
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qqyang110412楼
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