24小时热门版块排行榜    

查看: 4241  |  回复: 13

6491333

铁虫 (小有名气)

[交流] 带有酶切位点的引物,TM值怎么设置啊?

我的引物加了酶切位点是分别是68,66,65,66度。而原引物是50,52,54度左右!这扩片段是该怎么考虑设计反应TM值???

发自小木虫Android客户端
回复此楼
怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

781055707

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-08-22 22:43:36
xn8008: 应助指数+1 2016-08-23 08:03:04
以原引物是50,52,54度左右为准,引物的退火温度以结合模板DNA的碱基计算为准。
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2016-08-22 11:27:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
6491333: 金币+2, 积极的童鞋!!赞 2016-08-22 20:11:33
xn8008: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎发帖交流 2016-08-23 08:03:19
引用回帖:
3楼: Originally posted by 6491333 at 2016-08-22 11:53:48
那循环过后,产物会带着酶切位点,是不是需要换成加了酶切位点引物的TM值呢?我好苦恼
...

不用纠结,就用原引物的Tm值,至于若干循环后是否需要提高退火温度,没有必要,能扩出来就行,放心做吧。
4楼2016-08-22 15:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-23 08:03:31
引用回帖:
3楼: Originally posted by 6491333 at 2016-08-22 11:53:48
那循环过后,产物会带着酶切位点,是不是需要换成加了酶切位点引物的TM值呢?我好苦恼
...

它在从退火到延伸有个从55度到72的过程。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

采菊东篱下,悠然见南山。
6楼2016-08-22 16:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

6491333

铁虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 781055707 at 2016-08-22 16:17:24
它在从退火到延伸有个从55度到72的过程。...

对哈!哈哈,我扩出来了!!

发自小木虫Android客户端
怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
7楼2016-08-22 20:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luckydog52

木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 6491333 at 2016-08-25 13:13:54
做了梯度,扩的也亮
...

那就不要纠结那个tm最优, 抓紧时间做后续的试验。
时间紧迫不要浪费时间在这些小试验上

发自小木虫Android客户端
自信源于一次次成功的积累
13楼2016-08-25 13:38:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

6491333

铁虫 (小有名气)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-08-23 08:03:11
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2016-08-22 11:27:54
以原引物是50,52,54度左右为准,引物的退火温度以结合模板DNA的碱基计算为准。

那循环过后,产物会带着酶切位点,是不是需要换成加了酶切位点引物的TM值呢?我好苦恼

发自小木虫Android客户端
怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
3楼2016-08-22 11:53:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
5楼2016-08-22 15:22:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

waterzjf

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
前两个循环按不带酶切序列的tm计算,后面就算上带酶切序列的tm

发自小木虫Android客户端
8楼2016-08-24 13:13:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
9楼2016-08-24 16:50:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

6491333

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by waterzjf at 2016-08-24 13:13:27
前两个循环按不带酶切序列的tm计算,后面就算上带酶切序列的tm

也对

发自小木虫Android客户端
怪我咯|本人是用生命唱歌的歌手一名!
10楼2016-08-24 18:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 6491333 的主题更新
普通表情 高级回复(可上传附件)
信息提示
请填处理意见