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药理败类

木虫 (正式写手)

[交流] 做发酵产物对淀粉酶和葡萄糖苷酶抑制率实验,阳性对照抑制率为0是怎么回事

做发酵产物对淀粉酶和葡萄糖苷酶抑制率实验,以阿卡波糖标准品为阳性对照。但是在实验时发现阳性对照的抑制率一直很低,连1%都不到,这是怎么回事?
做预实验时用的阿卡波糖片还有30%左右的抑制率,这是怎么回事呢?下面是我实验方法。
1.原理:淀粉酶催化淀粉生成的还原糖与DNS试剂中的3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色物质,540nm测紫外吸收
2.实验内容
(0)空白对照管:0.2ml缓冲液+0.2ml缓冲液+0.4ml淀粉+2mlDNS
(1)对照管:0.2ml缓冲液+0.2ml酶(6U/ml)+0.4ml淀粉+2mlDNS
(2)本底管:0.2ml阿卡波糖+0.2ml缓冲液+0.4ml淀粉+2mlDNS
(3)试样管:0.2ml阿卡波糖+0.2ml酶(6U/ml)+0.4ml淀粉+2mlDNS说明:加到淀粉那里,37℃孵育10min,加DNS,100℃水浴10min终止,反应之后加15ml冰水稀释,再取1ml稀释液加4ml冰水二次稀释,540nm测吸光度。
计算公式:[1-(A3-A2)/(A1-A0)]×100%
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2楼2015-04-18 11:20:33
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3楼2015-04-18 11:35:16
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hydros

金虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
药理败类: 金币+10, 谢谢 2015-04-19 11:59:22
药理败类: 金币+1, 10 2015-06-19 11:14:14
预试验和正式试验,酶的来源和浓度是否一样?阿卡波糖对不同来源的酶抑制效果差很多。我碰到过用同样来源的酶,批号不同,结果差很多。可以降低酶的浓度过加阿卡波糖浓度试试

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-04-18 19:04:15
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木棉波波

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问你做出来结果了么?
5楼2015-08-22 12:17:45
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木棉波波

新虫 (初入文坛)

我做这个怎么也做不出来,情况跟你差不多,阿卡波糖的抑制率也不高。若你做出来了,能否分享下经验?
6楼2015-08-22 12:19:12
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小卢同学

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也在做这个实验,请问你的阿卡波糖的浓度是多少呢?
7楼2015-11-18 10:02:08
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