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北京石油化工学院2025年硕士研究生招生简章
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陶然悦

金虫 (正式写手)

[求助] 关于TMB显色,已有2人参与

请大神解答TMB和辣根过氧化物酶的作用机理?做ELISA时,一般先加过氧化氢,再加TMB,顺序能否调过来?
显色后为什么颜色会变?发生了哪些化学反应?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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swlsangon

木虫 (小有名气)

快乐的木虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们在做TMB显色是都是配置好A液与B液,在使用时取等量A和B混合后加到96孔板里,之后加终止液。在配制A和B时先用甲醇溶解TMB.
生命在于运动
2楼2015-07-07 12:39:32
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小丢丢超可爱

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
辣根过氧化物酶与过氧化氢反应释放氧自由基,然后氧自由基与TMB显色底物发生反应,显色后会变蓝,加入1NHcl终止后变黄,染后可拿去酶标仪读数
3楼2015-07-07 13:42:06
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陶然悦

金虫 (正式写手)

已找到正确答案,不用再回答了,谢谢!

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-07-12 13:42:12
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茗香薏然

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小丢丢超可爱 at 2015-07-07 13:42:06
辣根过氧化物酶与过氧化氢反应释放氧自由基,然后氧自由基与TMB显色底物发生反应,显色后会变蓝,加入1NHcl终止后变黄,染后可拿去酶标仪读数

请问一下,我是新手,我在做过氧化氢酶模拟物,一种复合材料,用它传感过氧化氢,我是先在缓冲溶液中加入TMB,再加入H2O2,然后加入材料,反应几分钟后拿到紫外去测量吸光度,没有加入终止剂,所以测量时间要求很严格,不太好控制,怎么办?那如果我加了终止剂盐酸后,和HRP一样要在450nm处侧吸光度么?
5楼2015-12-26 10:52:16
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yyy0305

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 茗香薏然 at 2015-12-26 10:52:16
请问一下,我是新手,我在做过氧化氢酶模拟物,一种复合材料,用它传感过氧化氢,我是先在缓冲溶液中加入TMB,再加入H2O2,然后加入材料,反应几分钟后拿到紫外去测量吸光度,没有加入终止剂,所以测量时间要求很严格 ...

未终止的话,读数OD652,适合做动力学,信号会随时间不断增长

发自小木虫Android客户端
6楼2015-12-26 13:50:55
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唐明宇面包

金虫 (正式写手)


前辈,打扰了,我有一个问题,请问为什么必须加入TMB呢,是因为要显色是么

发自小木虫IOS客户端
7楼2018-08-08 10:17:58
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