24小时热门版块排行榜    

查看: 1420  |  回复: 11
【悬赏金币】回答本帖问题,作者15761622115将赠送您 10 个金币

15761622115

铁虫 (小有名气)

[求助] 我提质粒pcDNA6,提取的浓度很低,十几纳克每微升,希望大家帮帮我已有1人参与

请大家多多帮忙,我的质粒抽不出来,快愁死我了,提质粒一个多月了。
这个质粒一年前提出来过,现在同样的方法提不出来了。和别的质粒一起提,其他质粒浓度都正常,就这个质粒浓度很低,一直提不出来。
1、碧云天的一步法制备感受态试剂盒制备感受态,实验室也一直用这个。
2、质粒转化DH5α。菌落长得也挺正常,每次都能长十几个,有几次长了卫星菌落。
3、15ml LB摇床12-16h都试过,OD600在2.4左右。
4、质粒提取用的是天根的。
5、每次和别的质粒一起提,别的都能提出来,就这个提的浓度特别特别低。
裂解液每次不超过5min,严格按照试剂盒的步骤,实在不知道问题出在哪了。

该怎弄,虫友们帮帮忙呀
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

2楼2019-05-15 12:40:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15761622115

铁虫 (小有名气)

是高拷贝的,质粒是pcDNA6/TR,准备做四环素诱导系统。

发自小木虫Android客户端
3楼2019-05-15 16:52:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15761622115

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wuhu0612331 at 2019-05-15 05:40:46
是不是个低拷贝质粒

是高拷贝的

发自小木虫Android客户端
4楼2019-05-15 16:52:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wuhu0612331

铜虫 (正式写手)

要不你转别的感受态试试,比如TOP10  TG-1

发自小木虫Android客户端
5楼2019-05-15 17:30:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

axian1

新虫 (著名写手)

换个试剂盒,或者最后一步少加点溶解液。延长摇床时间。(个人想法)
如果“别的都能提出来,就这个提的浓度特别特别低。”可能是转化步骤
6楼2019-05-26 06:08:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

匿名

本帖仅楼主可见
7楼2019-06-20 16:22:06
已阅   申请MicEPI   回复此楼   编辑   查看我的主页

Sily2020

新虫 (小有名气)

OD600在2,4左右是摇菌之后测了紫外吗
8楼2021-01-08 18:58:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Sily2020

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

OD600在2.4左右的意思是摇菌之后就测了紫外吗
9楼2021-01-08 19:00:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

junjieshao

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

10楼2021-01-13 03:49:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 15761622115 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 酯化和酯交换 40+3 whw818 2024-05-04 4/200 2024-05-06 11:41 by 宁静远行
[教师之家] 校级优秀本科毕业论文,比例多少?看指导教师资历吗? +7 河西夜郎 2024-05-04 10/500 2024-05-06 11:33 by huaxuejidi
[考博] 25年春秋博士申请 +4 梦想研究生 2024-05-04 7/350 2024-05-06 11:24 by 梦想研究生
[有机交流] 液晶单体纯度为什么要求这么高。 +3 Jonessnow 2024-05-01 3/150 2024-05-06 11:21 by 石头爱瓜
[基金申请] 多大算大龄? +5 wyjecho666 2024-05-01 6/300 2024-05-06 11:06 by 梦想成真2014
[基金申请] 特聘教授,算高级职称吗?青年基金还没结题的情况下还能报面上吗? +9 aasahr 2024-05-05 10/500 2024-05-06 10:43 by zwdct
[考博] 食品专业寻博士导师 +4 里氏什么棱 2024-04-29 9/450 2024-05-06 10:31 by 完美世界荒天帝
[考研] 考研日记 +6 九三hs 2024-05-02 7/350 2024-05-06 09:14 by 九三hs
[硕博家园] 大家能不能给点意见啊 +10 是小蚂蚁啦 2024-05-01 19/950 2024-05-06 08:51 by 是小蚂蚁啦
[高分子] 求推荐研究U V热熔胶的高手 +3 千年一虫 2024-05-04 3/150 2024-05-06 08:13 by jiduquegai
[考博] 求推荐博导 +4 想读博的我 2024-05-05 6/300 2024-05-06 07:11 by 想读博的我
[考博] 华南理工大学彭新文教授课题组招聘博士研究生1名(2024年9月份入学) +3 不吃魚的貓 2024-05-04 3/150 2024-05-05 23:12 by 清清清甜
[论文投稿] 想请问下IEEE Trans最后一轮,你们等了多久? +4 DD4Dr 2024-05-03 7/350 2024-05-05 16:14 by topedit
[催化] 孔径分布怎么分析? +3 林佳树 2024-05-02 7/350 2024-05-05 14:38 by 醉舞清风
[论文投稿] 想问下电池发在nano letters含金量高不高 +6 未来富婆蛙 2024-04-30 11/550 2024-05-05 10:53 by eemdl
[考博] 2024还有没有补录的博士 +6 crazy peng 2024-04-30 7/350 2024-05-05 10:17 by 宋mlk
[考博] 北京师范大学人工智能学院2024年第二批博士研究生招生报名 +4 taoto 2024-05-02 5/250 2024-05-04 15:46 by LYS1200
[考博] 博士申请 +6 Farssh 2024-04-29 11/550 2024-05-03 18:05 by 头秃食品狗
[高分子] 高分子聚合物有机材料方向的合作/招聘科研助理 +3 wwwzg 2024-05-01 3/150 2024-05-02 21:38 by Dr. Zhang
[教师之家] 一般发什么文章才能中青基啊 +7 保持肌肤 2024-04-29 7/350 2024-05-01 17:03 by zju2000
信息提示
请填处理意见